摘要：目的利用慢病毒载体和RNAi干扰技术沉默稳定转染了HBV全基因组的肝癌细胞HepG2.2.15的BUBR1基因,并检测沉默后对细胞增殖的影响。方法设计BUBR1基因的小干扰RNA,构建稳定遗传的慢病毒载体质粒,并进行测序鉴定。测序正确后用293T细胞进行包装并获得具有高感染性的BUBR1 shRNA重组慢病毒,用重组慢病毒感染HepG2.2.15细胞,通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达情况;Real-time PCR检测沉默效果;MTT法检测沉默BUBR1后对HepG2.2.15细胞增殖的影响。结果测序结果证明干扰载体中的特异性干扰序列完全正确,测序鉴定正确的BUBR1 shRNA重组慢病毒转染293T细胞48 h,荧光显微镜下可见绿色荧光,病毒滴度约为10-9 TU/mL;制备成功的重组慢病毒BUBR1 shRNA以MOI=10感染HepG2.2.15细胞,72 h后转染率均达80%以上,用嘌呤霉素筛选得到稳转细胞株;Real-time PCR检测显示3对shRNA靶点转染HepG2.2.15细胞后,均显著下调BUBR1 mRNA的转录水平;MTT结果显示沉默BUBR1对HepG2.2.15细胞增殖没有明显影响。结论成功构建BUBR1基因慢病毒干扰载体,该病毒载体能有效沉默HepG2.2.15细胞的BUBR1基因,沉默后不影响HepG2.2.15细胞的增殖。

摘要：针对农村订单定向医学生特点和医学微生物学课程培养目标,在实验教学中探索了智能教学工具“雨课堂”和案例教学法的联合应用。通过“雨课堂”发布经典临床案例,教师辅助学生剖析经典临床案例,设计病原菌的检验程序,并通过学生实践操作来进行验证。课后通过“雨课堂”发布临床实践案例,扩展实验课堂,开展在线讨论和作业批改等互动。教学评估数据表明该教学模式增加农村订单定向医学生的学习兴趣,提高了实验教学效果,培养学生的临床思维能力和实践操作能力。

摘要：目的了解初高中毕业生在新型冠状病毒肺炎疫情期间对疫情的认知情况及居家备考期间的心理状态,为复学复课提供信息和建议。方法采用横断面研究方法,2020年3月6-9日重点抽取贵州省内5个地级行政区的15所中学的初高中毕业生,利用“问卷星”平台进行调查;参考国家卫生健康委员会相关诊疗方案、广泛性焦虑量表、抑郁症筛查量表设计问卷;应用SPSS22.0统计软件进行数据分析。结果共收到有效问卷1170份,受访对象的疫情基本知识平均得分为(67.29±15.85)分;部分受访学生的防疫措施存在误区,服用双黄连口服液、饮用茶水或饮用豆浆预防病毒的学生分别占10.1%(118/1170)、15.3%(179/1170)、7.3%(85/1170)。调查开始前2周,6.7%(78/1170)的学生存在中重度以上焦虑情绪,7.6%(89/1170)的学生存在中重度以上抑郁情绪。logistic回归模型分析显示:女学生和高三学生更容易出现轻度焦虑或轻度抑郁,女学生还易出现重度抑郁(P<0.05);同时,使用教学中包含防疫知识和心态调整内容的网课平台是初高中毕业生产生不同程度焦虑、抑郁的保护因素(P<0.05)。广泛性焦虑量表总分与抑郁症筛查量表总分呈正相关(r=0.595,P<0.05)。结论初高中毕业生对疫情有一定的认知,但个人防疫措施需加以指导及规范,部分学生存在一定的心理危机。