摘要：为制备一种可以实际应用于戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)核酸检测的质控品,即装载戊型肝炎病毒核酸片段的重组MS2噬菌体衣壳(rHEPC)。根据装甲RNA技术原理,设计将MS2噬菌体基因组的5’端部分非编码区、成熟酶蛋白、衣壳蛋白以及部分复制酶起始位点等编码基因与HEV ORF2保守区部分基因序列串联并合成目标基因MS2-HEV。随后将MS2-HEV基因克隆、插入原核表达载体pET-28b中构建pET-28b-MS2/HEV重组质粒,转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3),经过1mM/L IPTG诱导培养4h后,SDS-PAGE鉴定表达情况;将验证的表达菌体超声破碎、离心、取上清、去除核酸杂质后再经超滤离心纯化、浓缩,电镜分析回收浓缩的rHEPC形态;梯度稀释rHEPC进行稳定性鉴定包括DNase I、RNase A抗性以及保存期三方面的稳定性试验检测。SDS-PAGE分析结果表明重组MS2-HEV基因获得有效表达,重组rHEPC纯度高无杂带;RT-PCR鉴定结果表明设计的HEV保守基因序列成功地被包装到重组rHEPC中。进一步的病毒颗粒稳定性试验结果表明制备的rHEPC能够有效抵抗高浓度的DNase I和RNase A的降解作用,并且在-20℃条件下可以持续保存7个月而无明显降解。上述结果表明制备的rHEPC达到了作为RNA病毒核酸检测阳性质控品的基本要求。

摘要：研究旨在探索治疗以及控制沙门氏菌感染的新途径。试验以鸡肠炎沙门氏菌作为繁殖菌,从锦州某鸡场粪便样品中分离得到1株噬菌体,经斑点法和双层平板法对其进行验证,初步确定为沙门氏菌噬菌体,并命名为SP-1。试验设计特异性引物,对噬菌体进行PCR鉴定、产物测序、基因序列遗传进化分析,并对其进行热稳定性、pH值敏感性的测定。结果显示:PCR扩增出预期片段大小为784 bp;同源性分析显示,该噬菌体为肠炎沙门氏菌噬菌体。研究表明,噬菌体SP-1在30~50℃、pH值5~11之间均具有较好活性,且具备作为治疗鸡肠炎沙门氏菌噬菌体制剂候选毒株的潜在应用价值。

摘要：为建立饲料中肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis,SE)的快速检测方法,针对sdfⅠ基因设计交叉引物,优化反应条件,建立饲料中肠炎沙门氏菌的交叉引物等温扩增联合横向流动试纸条可视化检测法(CPALFD)。检测条件:反应时间60 min、反应温度63℃、甜菜碱浓度1.2 mmol/L、Mg^(2+)浓度5.0 mmol/L、BST DNA聚合酶8 U、dNTPs浓度0.3 mmol/L。结果显示:检测限为1.0×10^(1)ng/L,与鼠伤寒沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、德尔卑沙门氏菌、单增李斯特菌、志贺氏菌等常见菌无交叉反应;对56份疑似污染样品检测结果显示,CPA-LFD法与国标法和PCR法检测结果一致。研究表明,初步建立饲料中肠炎沙门氏菌的CPA-LFD检测方法。

摘要：为研究中草药添加剂对繁殖母猪生产性能及免疫功能的影响,依据中兽医理论及中草药配伍原则组成母猪复方中草药添加剂。选择40头胎次相同及配种日期接近的母猪,随机分为4组,每组10头猪。母猪配种后开始喂妊娠母猪料,产前7~10 d转入产房后,喂哺乳母猪料。第1组、第2组和第3组分别在哺乳和妊娠饲料中添加0.25%、0.50%和0.75%的复方中草药添加剂,对照组母猪不添加任何药物,各组保持一致的常规饲养条件和方式。结果表明：试验组母猪的产活仔数、成活率、初生质量、断奶质量和母猪猪瘟抗体平均效价均比对照组高,其中第2组和第3组母猪产活仔率和成活率与对照组相比差异显著（P〈0.05）;仔猪初生质量和40日龄质量与对照组差异极显著（P〈0.01）。仔猪腹泻头次试验组比对照组显著降低（P〈0.05）。说明所设计的母猪复方中草药添加剂能增强母猪和新生仔猪的抗病能力,显著提高繁殖母猪的生产性能（P〈0.05）。

摘要：为研究六神曲、枳壳等11味中草药组成的复方添加剂对荷包猪生长性能及肉品质的影响，试验采用单因素完全随机设计．将36头体重10kg左右的健康荷包猪随机分为3组。对照组日粮中不添加中草药．两试验组日粮中分另1j添加01％和O．3％中草药。预饲期30d．正式期9个月。，试验结果显示，日粮中添加0．1％～0．3％中草药能显著促进荷包猪日增重，提高瘦肉率，增加肌内脂肪含量（P〈0．05），显著降低料肉比、失水率及背膘厚度（P〈0．05），日粮中添加03％中草药可显著提高眼肌面积．显著改善煮熟猪肉的易咬入度和风味（P〈0．（15）、，由此可见，日粮中添加一定水平的由六神曲、枳壳等11味中草药组成的复方添加剂能提高饲料转化率，促进荷包猪生长，改善猪肉品质和风味。

摘要：根据已发表的PRRSVORF5基因序列设计引物,经RT-PCR对辽宁省PRRSV LN/0901株ORF5基因片段进行扩增、克隆及测序,结果得到长度为739bp的ORF5基因完整序列,与已知代表毒株进行核苷酸及其编码氨基酸同源性比对和系统进化树分析,LN/0901ORF5基因序列与VR-2332株同源性达到88.6%,而与LV株,则相差甚远,仅为61.7%,表明PRRSV LN/0901病毒株为美洲型,与CBB-1-F3T、GD2007、JXA1、BJ0708等毒株同源性高达98.7%～99.5%,表明该病毒与2006年以来国内的多数流行变异株遗传关系相近。通过对PRRSV LN/0901ORF5进行氨基酸疏水性及其编码蛋白跨膜区预测分析,表明该毒株ORF5具有多个抗原优势位点,与国内其他毒株既有共同位点又有区别位点,可以做为辽宁地区开发研制PRRS基因工程疫苗的重要蛋白基因。

摘要：为了研究银翘天甘组方中金银花、连翘、天花粉、甘草4味中药的最佳剂量配比,利用SI测定方法设计试验,微管-平板法测定各试验药物的MIC,计算SI值,依据呈现协同作用的SI值获得组方剂量配比,以浸膏率与MIC为验证依据,确定组方的最佳剂量配比。结果表明,四味中药配伍体外抗菌活性呈现协同作用的SI值在0.625~0.750之间,银翘天甘对大肠埃希菌有协同作用的剂量配比为2∶3∶9∶4,对猪链球菌2型有协同作用的剂量配比为1∶6∶72∶2;验证试验结果表明,前者浸膏率显著高于后者（P〈0.05）,对大肠埃希菌的体外抗菌活性极显著高于后者（P〈0.01）,MIC为20μg/mL,对猪链球菌2型的抗菌活性也优于后者,MIC为30μg/mL。由此得出银翘天甘组方中金银花-连翘-天花粉-甘草体外抗菌的最佳剂量配比为2∶3∶9∶4。

摘要：参照国内外已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF5基因序列设计1对引物,建立检测PRRSV的RT-PCR方法,并对长春周边不同地区10个猪场送检的20份病料进行检测。特异性试验、敏感性试验和重复性试验结果表明,此方法可以用于临床检测PRRSV。应用该方法从3个猪场的4份病料检出PRRSV,证实长春周边地区存在PRRSV感染。

摘要：根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因序列设计2对特异性引物,第1对通用引物扩增美洲型经典毒株和变异毒株Nsp2基因(466bp/376bp),第2对引物特异性扩增欧洲型毒株ORF7基因(580bp)。反应条件优化后,建立了能够同时检测美洲型经典毒株、美洲型变异毒株和欧洲型毒株的多重PCR检测方法。该方法可以特异性扩增3种毒株的基因,目的基因片段大小差异在90bp以上便于电泳观察,重组质粒标准品检测下限为1.93×103拷贝。应用该方法检测183份临床疑似病例,结果 PRRSV阳性35份,其中美洲型经典株2份,美洲型变异株31份,欧洲型毒株3份,美洲型变异株和欧洲型毒株混合感染1份。表明建立的多重PCR检测方法具有快速、准确、敏感等优点,对PRRSV 3种毒株的快速诊断有十分重要的意义。

摘要：根据GenBank中收录的鸡肠炎沙门氏菌OmpF基因序列设计1对引物,以鸡肠炎沙门氏菌辽宁分离株基因组为模板,扩增鸡肠炎沙门氏菌OmpF基因,用IEDB Analysis Resource在线预测分析,该基因可能存在15个线性B细胞抗原表位;同时将该基因克隆至原核表达载体PGEX-4T-1中,构建重组表达质粒PGEX-4T-1-OmpF,转入大肠杆菌BL21中,获得OmpF重组蛋白。Western-blot检测结果表明,该重组蛋白的分子质量约为66 kD(含标签蛋白),能被鸡沙门氏菌阳性血清识别,初步证实该蛋白具有免疫原性,为鸡肠炎沙门氏菌亚单位疫苗的进一步研究和开发奠定了理论基础。