摘要：目的建立一种用于中华按蚊杀虫剂抗性相关kdr基因突变检测的实时荧光定量PCR方法。方法根据中华按蚊kdr基因序列及其L1014位点常见的突变类型设计一对引物和三条TaqMan MGB探针,对TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR反应体系和条件进行了优化,选择经测序鉴定后的6种中华按蚊kdr基因常见类型对该方法进行验证,并用该方法对50个实验室和113个现场中华按蚊样本进行检测。结果实时荧光定量PCR方法能对中华按蚊kdr基因6种不同的基因型进行检测,单管法可判断kdr基因L1014是否发生突变,双管法可对具体突变类型进一步鉴别。经检测,50个实验室样本均为野生型纯合体,而113个现场样本中,仅12个样本为野生型纯合体,其余101个样本均发生了L1014F或L1014C突变,突变频率为87.61%。结论TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR可用于中华按蚊kdr基因L1014位点突变的检测。

摘要：目的从苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bti)以色列亚种中获得cry4B、cry11A和cyt1A3种主要杀蚊幼虫蛋白的基因,并进行克隆和原核表达。方法根据GenBank上3种基因的已知序列设计合成引物,应用PCR技术扩增目的基因,克隆入pUC19质粒,阳性克隆质粒经酶切和测序鉴定。将测序鉴定的3种蛋白基因克隆入原核表达载体(pET32c)进行原核表达。结果PCR扩增获得特异性的基因片段,重组质粒经酶切后获得预计大小的基因片段,并测序鉴定。序列结果与已知序列一致。原核表达载体经ITPG诱导,获得预计大小的目的蛋白。结论成功克隆了苏云金芽孢杆菌以色列亚种的3个主要杀蚊幼虫蛋白的基因,并进行原核表达。