摘要：目的 :构建能表达人Endostatin的真核表达质粒。方法 :设计引物从成人肝cDNA文库中通过PCR扩增到EndostatincDNA ,并在 5′端融合编码人胰岛素信号肽序列 ,经测序证实后连接到真核表达载体pcDNA3.1(- )中。将携带基因的真核表达载体质粒pcDNA3.1(- ) SEND转染HT10 80细胞后用G4 18筛选获得克隆 ,采用RT PCR和West ern blot检测Endostatin的表达。结果 :测序结果表明克隆的人EndostatincDNA完全正确 ,并且在其 5′端融合编码人胰岛素信号肽序列 ;RT PCR显示转染后的HT10 80细胞可以有效地转录EndostatinmRNA ;Western blot检测到转染后的HT10 80细胞上清有相应的蛋白质 ,大小为 2 0kD左右。结论 :含有人胰岛素信号肽序列的人EndostatincDNA重组质粒pcDNA3.1(- ) SEND转染HT10 80细胞后可以有效的表达目的蛋白并能分泌到细胞外 。

摘要：基因敲除（gene ***）是基因打靶的一种方法，是根据DNA同源重组的原理而设计的一项技术。通过DNA分子的同源重组，特异性地在基因组的某个位点引入预定的突变，进而获得基因型发生了改变的基因打靶小鼠，以研究目的基因的体内功能或相关疾病的致病机制。睾丸的主要功能是产生精子和分泌睾酮，在睾丸发育过程中，任何基因的突变或者是酶、蛋白质的缺失都会对睾丸的正常功能造成一定的影响，导致雄激素浓度、精子数目、精子形态、精子活动力等指标异常，进而影响男性的生育能力。近年来，在国内外的研究中，