摘要：目的建立一种催化发夹自组装(CHA)联合成簇间隔的短回文重复序列及其关联蛋白12a(CRISPR-Cas12a)的传感技术,用于外泌体源性微小RNA-21(miR-21)的检测并分析其性能。方法选取2023年9—10月在陆军军医大学第一附属医院确诊为乳腺癌的患者8例为乳腺癌组;选取同期健康体检者8名为健康对照组。采用试剂盒提取血浆外泌体及其miR-21。针对miR-21序列设计DNA发夹和CRISPR RNA序列。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和荧光分光光度计验证检测技术可行性。进一步优化发夹浓度、CHA反应时间、Cas12a蛋白浓度和Cas12a蛋白反应时间。在此基础上,检测不同浓度(0、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、7.5、10.0 nmol/L)的miR-21,收集荧光强度采用一元线性回归方法做线性分析以评价方法学的灵敏度,同时检测不同类型miRNA(miR-31、miR-26a、miR-192、miR-25-3p)及空白对照以评价方法学特异性。采用病例对照研究,用该检测技术和逆转录PCR方法检测乳腺癌组和健康对照组血浆外泌体源性miR-21的相对表达水平以评价其临床样本检测能力。结果应用CHA联合CRISPR-Cas12a技术建立了外泌体源性miR-21的检测方法。该方法检测miR-21的浓度与荧光强度呈良好的线性关系(相关系数为0.9667),线性检测范围为0.1~10.0 nmol/L,检测限为87.81 pmol/L。miR-21的检测荧光强度为450.27±23.96,高于miR-31、miR-26a、miR-192、miR-25-3p和空白对照组(分别为98.89±7.35、98.12±2.07、98.93±2.45、96.66±2.45、82.93±3.54),差异均有统计学意义(P均0.05)。结论建立了CHA联合CRISPR-Cas12a检测外泌体源性miR-21的高灵敏度与高特异性的传感技术,其检测血浆外泌体源性miR-21的结果与逆转录PCR结果一致,可用于乳腺癌患者筛查。

摘要：介绍了一种新型声表面波氨气传感器的基本工作原理和设计方法,声表面波器件的振动模式为瑞利波模式,工作频率为500 MHz。聚苯胺作为敏感膜材料,电路结构采用参比-差分输出方式。通过优化声表面波器件设计、薄膜制备工艺和气路、电路设计,研制出声表面波氨气传感器,其具有灵敏度高,响应速度快和解吸附快的特点。

摘要：目的建立一种检测甲型H1N1流感病毒耐药基因单碱基突变的滚环扩增技术(rolling cycle amplification,RCA)。方法以甲型H1N1流感病毒耐药基因M2基因和NA基因为研究对象,设计检测该基因突变位点的环化探针,环化探针通过与发生单碱基突变的基因特异性结合并被连接成闭合环状,进行滚环扩增后从而特异性地检测单碱基突变。讨论用于该检测的RCA技术的合适反应条件,通过对人工合成的野生型和突变型靶序列检测,确定该方法的特异性和灵敏度。最后通过对临床标本的检测及与测序结果比对,验证该方法的准确性。结果检测单碱基突变需要严格的反应条件,采用热循环连接法和提高连接温度(65℃),保证了检测特异性。通过对含有不同浓度突变靶序列标本的检测确定了该方法能检测出最低1%含量的突变株。RCA技术检测结果与测序方法结果一致。结论成功建立检测甲型H1N1流感病毒耐药基因单碱基突变的RCA技术。

摘要：医学检验技术是一门以临床应用为目的不断更新发展的多学科交叉渗透的学科。伴随信息技术高速发展,为顺应未来高等教育课堂教学改革的趋势,医学检验技术的教学设计也需探索更为高效易行的策略和方法。BOPPPS教学模式是一种以教学目标为导向,以学生为中心的教学模式,能够使学生进行参与式学习,并及时根据学生反馈,调整课堂教学活动进度以达到更佳的教学效果。该文探讨了高等院校基于BOPPPS教学模式结合信息化手段的医学检验技术专业课程教学设计,为之后医学检验技术专业课程达到更佳的教学效果提供了新思路。

摘要：目的建立一种基于重组酶介导扩增技术（RAA）与分子信标相结合的病原菌恒温快速检测方法。方法方法学的建立。通过金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）所对应的基因设计相应引物及分子信标探针，不断调整引物浓度比例以确定最佳引物浓度比来进行不对称扩增，利用不对称重组酶介导扩增并与分子信标探针杂交，通过琼脂糖凝胶电泳及荧光采集观测结果。将阳性质粒以10倍的梯度稀释，检测该方法的灵敏度。利用该RAA杂交法检测大坪医院检验科微生物室保存的2016年12月的72株包含金黄色葡萄球菌及葡萄球菌属其他种细菌的菌株，以检测该方法的特异性。在特异性实验基础上添加我室保存的2016年12月的39例其他菌株进行Kappa一致性检验及临床诊断效能评价。结果当限制性引物与非限制性引物的浓度比例在1∶20时，产生单链DNA（ssDNA）的效率最高。不对称RAA扩增与分子信标探针杂交的效率明显高于对称扩增。该方法的灵敏度为20拷贝/μl。RAA杂交法能够将金黄色葡萄球菌与葡萄球菌属其他菌株区分，与传统金标准相比Kappa为0.860，一致性良好。经过对111株菌株的检测，该方法敏感度为92.5%（37/40），特异度为97.2%（69/71），阳性预测值为94.9%（37/39），阴性预测值为95.8%（69/72），阳性似然比为33.04，阴性似然比为0.077，约登指数为0.897。与传统金标准相比，Kappa为0.902，两种方法一致性良好。结论通过对不对称RAA扩增条件的优化及与分子信标探针的结合，建立了RAA杂交技术检测细菌DNA的新方法，为恒温扩增应用于临床奠定基础。

摘要：目的 以6种临床常见突变型为研究对象，建立一种快速检测β－地中海贫血的新方法。方法 收集重庆市大坪医院2015年1至12月正常野生型标本50份和6种临床常见突变型标本42份，PCR扩增外周血β－珠蛋白基因，扩增产物与独立设计的连接检测反应－制式连接探针（LDR－ULP）体系杂交后，荧光定量PCR检测突变类型，琼脂糖电泳验证检测结果，标本梯度稀释法分析LDR－ULP结合荧光定量PCR方法的灵敏度，Kappa检验分析与反向膜杂交法的检测一致性。结果 LDR－ULP杂交反应与多重连接探针扩增技术（MLPA）相比可提高杂交效率2.53倍，经荧光定量PCR扩增后，6种临床常见突变型均出现了明显的扩增曲线，而正常野生型则在40个循环内均无明显扩增曲线。本方法在DNA标本大于5 pg范围内均能得到明显的扩增曲线，对92份临床外周血标本DNA进行检测，本研究方法与反向膜杂交方法结果一致率为100%。结论 本研究通过LDR－ULP技术的特异性，结合荧光定量PCR方法的灵敏性和实时快速的特点，建立了一种操作简便、价格低廉、检测快速的β－地中海贫血的检测新方法。

摘要：目的在中国西南地区汉族人群中验证PRDM1-ATG5基因之间的rs548234 T/C单核甘酸多态性与结核病发生风险间的相关性。方法采用病例-对照研究设计,募集了234例结核病患者和208例健康对照个体。应用直接测序法对rs548234多态性进行分型,采用卡方检验和Logistic回归分析,校正性别和年龄等混杂因素的影响,评价rs548234位点与结核病发生风险,以及结核病亚型的遗传关联性。结果 rs548234位点在病例和对照组中的基因型分布均符合哈-温平衡。在整个研究人群中本位点与结核病的发生风险无遗传学关联。然而我们发现原发性肺结核病患者中CC基因型频率高于健康对照人群(CC vs TT:OR=2.14,95%CI=0.91～5.10,P=0.079;CC vs CT+TT:OR=2.50,95%CI=1.09～5.73,P=0.026),提示rs548234 C等位基因可能增加原发性肺结核病的发生风险。结论在中国西南地区汉族人群中PRDM1-ATG5基因之间的rs548234 T/C多态性位点可能参与了原发性肺结核病的发生发展。