摘要：设计一对含EcoRⅠ—起始码和终止码—SalⅠ的鼠抗体V_H引物,用PCR法对重组质粒p1A12V_H中插入基因1A12V_H进行突变,突变的PCR产物的序列测定表明,在1A12V_H基因两端成功地插入了EcoRⅠ—起始码和终止码—SalⅠ。将突变后1A12V_H依次克隆入pSL301质粒和pAcEEUL8质粒中,使ⅠA12V_H基因两端均接上BamHⅠ接头,用BanHⅠ酶切,将1A12V_H基因克隆入杆状病毒表达载体pAcCL29质粒的多角体基因中的唯一BamHⅠ切点处,经计算机分析,用BamHI;EcoRV/EcoRⅠ;SalⅠ三组酶切,筛选出克隆的1A12V_H基因方向与多角体启动子基因方向一致的重组杆状病毒转基因质粒pAc1A12V_H。CsCL—EB梯度平衡离心法纯化pAc1A12V_H,转化AcNPV基因组DNA,然后转染的sf9细胞,空斑筛选和纯化1A12V_H—AcNPV重组杆状病毒,并用PCR法作进一步鉴定。

摘要：目的 :　建立直接分型检测妇女生殖器单纯疱疹病毒 (HSV)的抗原捕获聚合酶链反应 (AC -PCR)。方法 :　用抗HSV型共同性糖蛋白单克隆抗体 ,包被聚苯乙烯离心管 ,捕获HSV ,同时加入 3个引物 :HSV - 1 HSV - 2型共同性上游引物及HSV - 1和HSV - 2型特异性下游引物 ,进行PCR扩增。结果 :HSV - 1和HSV - 2标准病毒株均分别扩增出与设计大小相符的 4 77bp和 399bpDNA条带。AC -PCR可检测到 10PFUHSV - 1和 1PFUHSV - 2。用AC -PCR检测了 36 5份妇女生殖器拭子标本 ,阳性 10 1例(2 7.7% ) ,2 3例为HSV - 1(占 2 2 .8% ) ,78例为HSV - 2 (占 77.2 % ) ;其中 112份标本同时用AC -PCR和分离培养法检测 ,AC -PCR的阳性率为 2 6 .8% (30 112 ) ,分离培养法的阳性率为 2 0 .5 % (2 3 112 ) ,两者差异有显著性 (χ2 =4 .5 ,P <0 .0 5 )。结论 :　AC -PCR是特异、敏感。

摘要：作者依据单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）ＤＮＡ聚合酶基因的核苷酸序列，设计三个引物，一个上游ＨＳＶ－１／ＨＳＶ－２型共同性引物，一个下游ＨＳＶ－１型特异性引物和一个下游ＨＳＶ－２型特异性引物，建立分型检测ＰＣＲ的方法。ＨＳＶ－１的扩增产物是４７７ｂｐ，ＨＳＶ－２扩增产物为３９９ｂｐ，扩增产物的克隆及序列分析表明，该方法特异，用此方法对ＢＡＬＢ／ｃ幼鼠中枢神经系统ＨＳＶ感染的脑标本进行了检测，进一步证实直接分型检测ＨＳＶ的ＰＣＲ方法敏感特异，分型准确。