摘要：采用生物素标记的（CA）15探针和磁珠富集法构建了大珠母贝（Pinctada maxima）微卫星DNA文库，随机挑选1200个菌落，经PCR筛选得到298个候选克隆，成功测序246个，分析获得251个微卫星序列，其中完美型、非完美型和混合型分别占63％、32％和5％。除探针中使用的CA重复外，还得到AT、GT、TC、AG、GC、TAA、CAA、AGG、GATA、GACA、GTGC、CGTC、GACG、CTGT等重复序列。设计引物90对，挑选其中30对合成并筛选出21对能在大珠母贝基因组有效扩增的引物。种群PCR扩增后利用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行检测，获得了10个多态位点，共检测出59个等位基因，片段长度范围为133～444bp。各位点等位基因数2～8个，平均等位基因数5．9个；有效等位基因数为1．3423-6．0000，平均为4．1240；多态性信息含量（CPI）为0．2225-0．8118，平均0．7179；期望杂合度（Hc）为0．2593-0．8475，平均0．7179；观测杂合度（H0）为0．3000-0．8000，平均0．5333。这些微卫星多态性标记的获得，为进一步开展大珠母贝遗传育种、保护生物学和种群遗传多样性等研究奠定了一定基础。

摘要：EF-hand结构域在真核生物细胞内钙离子吸收和运输中发挥重要作用,在贝类中可能参与贝壳和珍珠质的形成。根据已报道的贝类中具有EF-hand结构域的碱基序列设计简并引物,从大珠母贝外套膜cDNA文库中筛选得到PMMG1基因(大珠母贝外套膜基因1)。PMMG1基因全长618 bp,开放读码框编码140个氨基酸,N-端的22个氨基酸肽段为信号肽。PMMG1氨基酸序列与合浦珠母贝PFMG1的一致性为56%,预测有两个EF-hand结构域。选取编码PMMG1成熟蛋白的cDNA序列插入pET-32a质粒构建表达载体,通过IPTG诱导,Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,成功获得预期大小的融合蛋白。凝胶电泳迁移率的变化证明PMMG1蛋白具有结合Ca2+/Mg2+的活性,组织特异性表达表明PMMG1基因在外套膜的表达量远高于其他组织。大珠母贝外套膜基因PMMG1的克隆与表达研究为进一步研究该蛋白在珍珠质矿化中的作用、探讨珍珠质形成的分子生物学机制奠定了一定基础。

摘要：《贝类增养殖学》课程是水产养殖学专业的基础课程,分析了该课程理论教学的现状,从课程内容、传统教学中存在的问题两大方面详细解析了《贝类增养殖学》课程的突出问题。同时,指出了慕课在《贝类增养殖学》课程中的应用前景。最后,从《贝类增养殖学》融入“慕课”后的课程教学设计方面探索了教学改革的途径,通过学生为主导的教学模式、创新理论教学内容、优化课程体系、优化考核模式等多种方式相结合提高教学质量、提升学生的学习兴趣,为培养水产养殖学专业应用型、创新型、复合型人才提供支撑。

摘要：克隆了石斑鱼神经坏死病毒（Nervous necrosis virus,NNV）的衣壳蛋白（Major capsid protein,MCP）基因序列并构建了绿色荧光蛋白（EGFP）基因与MCP基因的融合真核表达载体pEGFP-MCP,设计了3对针对MCP基因序列的小片段干扰性RNA（Small interfering RNA,siRNA）序列（NNV-001、NNV-002、NNV-003）,开展了转染方法、转染剂量与转染效果的研究,用脂质体转染法将pEGFP-MCP和不同剂量的siRNA共转染导入黑头呆鱼肌肉（FHM）细胞.结果表明,用无血清培养基转染、4-6 h后换液的转染方法,比不换液、只将转染混合物代替同体积培养基的转染方法效率高;当质粒的转染量为50、70、100和150 ng时,100 ng的转染量为最合适;在pEGFP-MCP与siRNA共转染组,3对siRNA序列都有干扰效果,均能干扰绿色荧光蛋白的表达,其中NNV-002效果最好.当siRNA终浓度为200 nmol/L时,显示出了较好的沉默效果.

摘要：该研究选取具有多态性的6对微卫星引物对构建的2批合浦珠母贝（Pinctada fucata）完全双列杂交家系的遗传多样性进行了分析。6个微卫星标记在9个家系360个个体中共检测到32个等位基因,有效等位基因（Ne）为1.758 7-3.586 5,观测杂合度（Ho）为0.144 4-0.488 9,期望杂合度（He）为0.432 0-0.722 2,Shannon指数（I）为0.691 9-1.507 4。9个家系都有单态位点,平均Ho为0.129 2-0.466 7,平均He为0.155 0-0.439 6,平均I为0.248 5-0.712 2。有19个位点（占35.19%）极显著地偏离Hardy-Weinberg平衡。各家系之间的遗传距离为0.109 0-1.137 2,遗传相似性系数为0.320 7-0.896 8。家系L4B46与L4B48的遗传距离最大,与D3D313的遗传距离最小。UPGMA法聚类分析显示,9个家系分为3支,L4B48单独成一支,B4D426、B4D427与D4B445聚成一支,其余家系聚成一支。该研究结果为合浦珠母贝家系选择育种的亲本选择与交配设计提供了科学依据。

摘要：采用生物素标记的（AC）15探针和磁珠富集法构建合浦珠母贝（Pinctada fucata）基因组DNA微卫星富集文库。随机挑选2097个克隆进行筛选,得到483个候选克隆（23.03%）,对其中135个阳性克隆测序分析发现122个克隆含有微卫星重复单元（90.37%）。进一步通过序列比对,最终得到65个具有特异微卫星序列的阳性克隆（53.28%）,其中包含85个微卫星 DNA结构域,其中完美型（perfect）70个,占82.36%；非完美型（imperfect）7个,占8.24%；混合型（compound）8个,占9.41%,重复次数主要分布在5-20（95.74%）,平均重复次数为7.83,（AC/GT）n重复所占比例最高（75.53%）。基于微卫星两端的侧翼序列,利用Primer Premier 5.0设计引物,获得11对具有多态性的微卫星引物。本研究为开展合浦珠母贝分子育种及资源评价分析提供了基础资料。

摘要：对本实验室以前设计的170对合浦珠母贝微卫星引物进行家系筛选,共有35对引物可以有效扩增,其中30对引物在家系中具多态性。共检测到67个等位基因,片段长度范围为131～297 bp,平均有效等位基因(Ae)1.7988个,平均观测杂合度(Ho)为0.4801,平均期望杂合度(He)为0.4165,平均多态性信息含量(PIC)为0.3369。试验结果表明,本研究筛选的35个微卫星位点,可用于合浦珠母贝遗传多样性分析、遗传图谱构建以及分子标记辅助选育等研究。

摘要：利用微卫星标记对2012年3月和6月分别构建的两批共17个合浦珠母贝（Pinctada fucata）选育基础群体进行了遗传多样性分析.6对微卫星引物在17个群体共680个个体中检测到29个等位基因,每个位点的等位基因数在2～7之间,平均有效等位基因数在2.06 ～ 3.07之间,平均观测杂合度在0.31 ～0.58之间,平均期望杂合度在0.46～0.65之间,平均多态信息含量在0.39～0.58之间,高度多态（PIC≥0.50）群体有11个（占64.7％）.Hardy-Weinberg平衡检验（卡方检验）的结果显示,在检测得到的102个数据结果中,有53个（占52.0％）极显著地偏离了Hardy-Weinberg遗传平衡（P＜0.01）.从遗传偏离指数（D）的结果可以看出,17个群体在不同的微卫星位点存在不同程度的杂合子缺失现象.本研究表明,两批群体的遗传多样性参数非常接近,每个群体的遗传多样性都较高,对群体之间的遗传距离和遗传分化格局有了初步的把握,为下一步交配设计构建下一代核心群体奠定了理论基础.

摘要：采用下潜式缆绳吊养大珠母贝幼苗，设计5个不同的水深，记录养殖海区的水文因子，测量大珠母贝的壳长和壳高两个性状指标，统计成活数，比较不同水层贝苗的生长情况和存活率。结果表明，大珠母贝在4、5、6m水层生长较快，3个深度下幼苗的生长差异不显著：2ITI和3ITI水深的贝生长速度较慢，其中3m水层的壳长与4、5、6m的差异显著。大珠母贝在5m的深度条件下养殖幼苗存活率最高，4nl水层次之，而在2m水深下幼苗的成活率最低（52％）。综合生长和成活数据可知，大珠母贝苗在4～5m养殖较合适。