摘要：根据GenBank中已发表的CAV纤突基因序列 ,设计合成 4对 8条引物 ,用已建立的PCR方法 ,对犬 2型腺病毒沈阳分离株第 5代强毒经蚀斑克隆驯化的第 6 0代毒弱毒 (SY_V6 0 )和犬 1型腺病毒长春犬株 (CCC_V6 )的纤突基因进行了扩增 ,PCR产物经纯化后进行基因序列测定 ,测定结果经拼接后得到一个由 16 32和 16 2 9个核苷酸组成的纤突蛋白全基因序列 ,分别编码 5 43和 5 42个氨基酸。犬 2型腺病毒 (SY_V6 0 )与犬 1型腺病毒 (CCC_V6 )的纤突基因的同源性达到 80 .48%。犬 2型腺病毒(SY_V6 0 )与犬 1型腺病毒 (CCC_V6 )纤突基因的同源性达到 80 .48% ;根据犬的腺病毒与人 2型腺病毒纤突蛋白的序列同源性比较结果 ,推测了犬腺病毒纤突蛋白的尾 (tail)、轴 (shaft,)、结 (knob)三个功能区的氨基酸序列 ,2个型之间的尾区同源性为 76 .9% ;轴区同源性为 78.5 9% ;其结区同源性为 83.2 4% ,而同型毒株之间结和尾区同源性较高 。

摘要：目的设计针对H5N1高致病性禽流感病毒(HPAIV)核蛋白(NP)基因的干扰RNA(siRNA),研究其在细胞水平抑制病毒复制的效果。方法根据siRNA设计原则,设计并合成3对靶向HPAIV NP基因的siRNA,构建表达性质粒(ps-NP732、ps-NP863、ps-NP1344),分别转染MDCK细胞并攻毒,通过病毒滴度测定r、eal-time PCR、间接免疫荧光试验和Western blot,检测siRNA抑制AIV复制的效果。结果设计的3对siRNA中,ps-NP863明显抑制AIV复制,病毒滴度与对照组相比降低31倍,real-time PCR、间接免疫荧光试验、Western blot结果与病毒滴度测定结果相符,而ps-NP732和ps-NP1344无抑制AIV复制作用。结论构建的ps-NP863可显著抑制HPAIV复制,为开发抗AIV治疗制剂和动物机体抗AIV研究奠定了基础。

摘要：为研究犬细小病毒(CPV)地方分离株的变异情况,本研究从洛阳市某宠物医院临床表现为出血性肠炎的患犬肛拭子样品中分离到一株病毒,对其进行血凝试验、间接ELISA试验、PCR试验及动物回归试验。结果表明该病毒分离株能够凝集猪红细胞;利用兔抗CPV血清进行检测,结果呈阳性。采用CPV检测引物进行PCR扩增,获得大小为559 bp的特异性片段,并且利用针对CPV VP2基因设计的特异性引物能够扩增到大小为1 755 bp的特异性片段。同源性比较和进化树分析均表明该分离株为一株CPV,将其命名为CPV-henan32-2013。氨基酸序列分析表明该分离株为CPV-2a型,并且发生了T322S、Y324I、P333A、A334G、S348C 5个位点突变。动物回归试验复制出了CPV典型症状的出血性肠炎、心包液增多及肺脏水肿充血。病理切片观察可见心肌细胞、肠粘膜上皮细胞和肺脏均有出血、坏死或脱落等特异性病变。本实验结果为进一步了解CPV的变异规律、疫苗株的选择和CPV病的有效防控奠定了基础。

摘要：目的探究山东省潍坊市蓝狐细小病毒VP2基因的遗传进化特征,了解国内蓝狐细小病毒流行毒株的分子特性。方法根据GenBank公布的BFPV及CPV参考株基因序列设计VP2基因引物,应用细小病毒PCR检测方法对来自山东省潍坊市某蓝狐养殖场的健康和腹泻粪便样品进行核酸检测,扩增核酸阳性样品的VP2全基因序列,使用MegAlign软件进行拼接整理,之后借助DNASTAR和MEGA7.0软件构建进化树进行遗传进化分析并完成核苷酸与氨基酸序列分析。结果20份样品中有15份样品(9份腹泻蓝狐样品、6份健康蓝狐样品)均呈细小病毒核酸阳性且扩增出符合预期长度的VP2基因特异性条带。序列同源性比对结果显示,BFPV/WF/2023株与国内CPV-2c参考株同源性最高,可达99.7%~99.9%,与疫苗参考株(CPV-2)同源性为98.7%;与FPV、MEV、BFPV参考株同源性最低,为98.1%~98.4%。系统进化树结果显示,BFPV/WF/2023株与国内CPV-2c参考株处于一个大分支且与BFPV参考株距离较远。蛋白氨基酸分析结果显示,BFPV/WF/2023株与国内CPV-2c参考株关键氨基酸位点(297 A、324 I、370 R、426 E)一致。结论山东省潍坊市健康和腹泻的蓝狐种群中均存在细小病毒感染,且蓝狐细小病毒已演变为犬科的优势毒株CPV-2c亚型,需加强对狐细小病毒感染情况的追踪和监测。

摘要：根据GenBanK中Barrett报道的犬瘟热病毒Onderstepoort弱毒株的附着或血凝蛋白基因序列，设计合成了能扩增760bp基因片段的半套式引物。用异硫氰酸胍—酚—仿一步抽取法提取细胞总RNA进行反转录，再以此产物进行半套式PCR扩增，并筛选出最佳PCR扩增。结果经半套式PCR扩增能得到与设计片段大小相同的产物，并且不扩增犬细小病毒、犬腺病毒、犬冠状病毒、狂犬病病毒的核酸。敏感性试验表明，此法能扩增出CDV强毒细胞培养物（毒价为10－5.8TCID50／0．1mL）10－6稀释的反转录产物，远高于常规PCR。经初步应用表明，此法可用于天瘟热的临床诊断和实验研究。

摘要：本研究根据Ｂａｒｒｅｔ．Ｔ报道的犬瘟热病毒（ＣＤＶ）Ｏｎｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ株融合蛋白（Ｆ）的基因序列，设计合成了一对可扩增出穿膜区基因的引物（Ｐ８和Ｐ１０），此对引物扩增的ｃＤＮＡ长度应为６２０ｂｐ。以我国现用的某犬瘟热疫苗弱毒感染Ｖｅｒｏ细胞的总ＲＮＡ进行反转录，此反转录产物作为ＰＣＲ的模板，经扩增后得到了约为６２０ｂｐ的ＰＣＲ产物。将此ＰＣＲ产物和ｐＧＥＭ－Ｔ载体质粒连接、转化、鉴定后，得到了含有Ｐ１和Ｐ２间片段的质粒。将此质粒进行序列分析，结果在两引物间的核酸长度为５７４ｂｐ。其相对于ＣＤＶＯｎｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ株、海豹瘟热病毒２型（ＰＤＶ２）和海豹瘟热病毒１型（ＰＤＶ－１），在核苷酸水平分别有１５、４２和１７１个的变异，同源性分别为９７．４％、９２．７％和７０．２％。在氨基酸水平分别有７、９和４３个的变异，同源性分别为９６．３％、９５．２％和７７．５％，由此氨基酸序列推测的氨基酸疏水性分布图，与其它毒株大致相同，但由此而预测的该毒株的二级结构与其它毒株则有显著的不同，毒株的这种变异进而可能影响到其蛋白质的结构与功能。本研究首次报道了国内现用ＣＤＶ疫苗弱毒融合蛋白穿膜区的基因序列，为进一步研究?

摘要：根据 Gen Bank中 Barrett报道的犬瘟热病毒弱毒株 Onderstepoort的血凝蛋白基因序列 ,设计合成了一对能扩增 76 0 bp基因片段的引物。用异硫氰酸胍 -酚 -仿一步抽提法提取细胞总 RNA进行反转录 ,再以此产物为模板进行 PCR扩增 ,筛选出最佳扩增条件。结果以此对引物进行 PCR扩增能得到与设计片段大小相同的产物 ,并且不扩增犬细小病毒、犬 I型腺病毒、犬冠状病毒、狂犬病病毒的核酸。敏感性试验证实 ,此法能扩增出稀释 1 0 0 0倍的 CDV强毒细胞培养物 ( 1 0 5 .1 TCID5 0 /0 .1 ml)的反转录产物 ,其敏感性远高于电镜负染和荧光抗体染色法。经初步应用表明 ,此法可用于犬瘟热的临床诊断和实验研究。

摘要：根据犬瘟热病毒H基因核苷酸序列 ,设计合成一对引物对贵州临床诊断为犬瘟热 (CD)病死犬的心、肝、脾、肾、粪便进行RT PCR检测。结果表明 :从心、脾、肾病料上清液中可扩增出 760bp的特异性带 ,与预期扩增片段长度相同 ;粪便和肝脏上清液RT PCR结果为阴性 ,但粪便上清液接种Vero细胞后连续传代 3代 ,每代细胞培养液RT PCR结果均为阳性 ;在检测的 2 2条病死犬中 ,有 1 9条病死犬检测到犬瘟热病毒H基因的特异性核酸片段 ,阳性率为 86 4% (1 9/ 2 2 )。

摘要：根据犬瘟热病毒（ＣＤＶ）融合蛋白（Ｆ）基因的核苷酸序列，设计合成了１０条引物。用１对引物从延吉犬病料中扩增出了含Ｆ２区基因的３１４ｂｐ的片段，除两端引物序列外为２６５ｂｐ，编码８８个氨基酸。它与日本弱毒株（ＣＤＶ－Ｊ）、Ｏｎｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ弱毒株（ＣＤＶ－ＯＮ）、海豹瘟热病毒２型（ＰＤＶ２）、１型（ＰＤＶ１）在核苷酸和氨基酸水平上的同源性，分别为９８．１％和９５．５％、９６．２％和９３．２％、９４．３％和９３．２％、７７．４％和８７．５％。对５份来自不同地区的ＣＤＶ病料的融合区基因片段进行了扩增、克隆和序列分析，其中北京１号犬（ＣＤＶ－Ｂ１）、２号犬（ＣＤＶ－Ｂ２）、沈阳犬（ＣＤＶ－Ｓ）和长春犬（ＣＤＶ－Ｚ）的２８３ｂｐ片段完全相同，而与哈尔滨犬（ＣＤＶ－Ｈ）的该片段有３个核苷酸和２个氨基酸不同。在核苷酸和氨基酸水平，北京犬野毒株等与ＣＤＶ－Ｈ、ＣＤＶ－Ｊ、ＣＤＶ－ＯＮ、ＰＤＶ２、ＰＤＶ１的同源性分别为９８．９％和９７．９％、９７．９％和９５．８％、９６．５％和９７．９％、９３．３％和９８．９％、７７．０％和８４．２％。本研究揭示了ＣＤＶ的流行毒株和相关毒株在融合蛋白上的亲缘关系，进一步证实了ＰＤＶ２?

摘要：利用RT-PCR技术检测了来自不同地区水貂、狐狸、貉子和老虎病料中是否存在犬瘟热病毒。根据犬瘟热病毒H和N基因核苷酸序列,设计合成2对引物。利用这2对引物分别对14份病料进行了检测。利用H基因引物从7份病料中扩增出761 bp的核酸片段,利用N基因引物也从同样的7份病料中扩增出586 bp的核酸片段。其余病料的检测结果为阴性。2对引物对病料的检测结果一致。