摘要：家蝇卵黄蛋白基因编码的卵黄蛋白是家蝇胚胎发育的重要营养来源 .根据 3种家蝇卵黄蛋白cDNA保守序列设计引物 ,用PCR技术从家蝇基因组DNA中扩增到大小为 76 8bp的mdYP1基因的部分DNA片段 .经地高辛标记成特异性探针 ,从构建的家蝇基因组文库中筛选出一个阳性克隆 ,并从该克隆中分离到大小为 3991bp的mdYP1基因组基因 .序列分析显示 ,该基因组序列含有约1 6kb的 5′ 上游区和 1 0kb的 3′ 下游区 ,编码区由一个 6 1bp的内含子和大小分别为 2 2 2bp和10 2 8bp的 2个外显子组成 .5′ 上游区含有典型的CAAT TATA盒 .

摘要：根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）ATCC VR-2332株的ORF2～6基因的核苷酸序列，设计合成4对特异性引物，用RT—PCR方法扩增出PRRSV河南地方株（命名为HN-2株）的ORF 2～6片段，克隆到pUC-57T载体并进行测序。应用DNAStar序列分析软件对分离株的ORF 2～6基因和其推导的氨基酸序列与不同来源的9个PRRSV毒株进行了同源性比较，结果表明：该分离株的ORF 2～6基因与不同来源美洲型毒株之间的同源性分别为89．1％～98．1％和81．4％～96．1％，而与欧洲型毒株之间的同源性仅为46．9％～61．9％和44．2％～45．0％；同时将分离株ORF 2～6基因的推导氨基酸序列与7个关洲型PRRSV毒株进行变异分析比较，证实了该分离株ORF 2～6基因发生了变异。

摘要：对广东省几个地区发生疑似PRRSV感染的猪场送检的502份血清进行RT—PCR检测。将检测到的阳性血清接种到Marc-145细胞上并连续传代4～5次．收获出现明显细胞病变（CPE）的样品，利用蚀斑试验克隆纯化PRRSV。根据高致病性PRRSVNsp2基因缺失区的两端保守区设计了1对引物区分经典PRRSV和高致病性PRRSV。研究结果表明，成功分离到12株PRRSV并纯化出2株病毒。从502份血清样品中检测到156份阳性血清，PRRSV感染阳性率达32％，经鉴定均为高致病性PRRSV变异株。对分离毒株的Nsp2基因序列进-步分析，发现此次分离株Nsp2基因与VR-2332株（70．7％-74．6％）的核苷酸同源性较JXAl株（87．1％-100％）偏低；在系统进化树上分离株与JXAl变异株亲缘关系比较近，而与VR-2332株亲缘关系比较远。说明广东省地区普遍存在PRRSV的感染．并且病毒出现了不同程度的变异。

摘要：【目的】克隆H9N2亚型禽流感病毒(AIV)河南株核蛋白(NP)基因,并将NP主要抗原表位区在大肠杆菌中进行表达,为禽流感基因工程诊断抗原的制备和开发奠定基础。【方法】根据GenBank公布的禽流感病毒NP基因序列设计引物,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从H9N2亚型AIV河南株感染的鸡胚尿囊液RNA中扩增AIV河南株NP全基因,将扩增的PCR产物克隆到pGEM-T easy载体并进行测序。通过PCR和酶切方法将NP主要抗原表位区亚克隆到原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28NP,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达重组蛋白。【结果】测序结果表明,克隆的H9N2亚型AIV河南株NP基因全长为1497bp,包含1个完整读码框,编码498个氨基酸,与GenBank中不同来源、不同亚型的其他7株禽流感病毒NP基因的核苷酸同源性达到95%以上,氨基酸同源性达到98%以上。SDS-PAGE可检测到相对分子质量约为42 ku的重组蛋白。经1.0 mmol/L IPTG诱导5 h时,重组蛋白的表达量最高。Western blot分析表明,重组蛋白能够与H9亚型AIV阳性血清发生特异反应。【结论】NP基因非常保守,建立的表达系统能够表达NP蛋白且表达蛋白具有良好的免疫原性。

摘要：根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型标准株(ATCC VR-2332)的部分ORF6及ORF7保守序列和已发表的猪圆环病毒株PCV-2(DQ195679)的ORF-2基因保守序列,设计合成了2对特异引物,分别扩增出大小为426 bp和631 bp特异性基因片段,通过优化RT-PCR和PCR条件,最终建立了可同时检测PRRSV和PCV-2的复合PCR诊断方法。应用此方法分别对河南省不同地区送检的15头份病、死猪的血清、淋巴结、肺、肝等组织进行检测,结果8头份PRRSV阳性,5头份PCV-2阳性,其中3头份PCV-2和PRRSV同时为阳性,其余猪为阴性,健康猪对照样品全部阴性。结果表明,PRRSV和PCV-2复合PCR诊断方法具有高度特异性和敏感性,可用于兽医临床诊断。

摘要：根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型标准株(VR-2332)的ORF 6及ORF 7部分保守序列,设计合成1对特异引物,通过优化RT-PCR反应条件,建立了从血清中检测PRRSV RNA的RT-PCR诊断方法。60日龄仔猪经鼻腔接种1 mL 105.6TC ID50/mL PRRSV强毒液,7 d后肌肉注射中和效价为1∶64的特异性高免血清,每隔1周利用RT-PCR检测猪体内PRRSV RNA,5周内PRRSV RNA检测均为阴性,表明高滴度特异性中和抗体完全终止了PRRSV感染猪体内的病毒复制。

摘要：根据GenBank发表的鸭IL-18cDNA基因序列设计、合成一对引物,应用RT-PCR技术,无需用非特异性免疫原如PHA等刺激脾淋巴细胞,直接提取脾淋巴细胞总RNA,扩增固始鸭IL-18基因,并克隆、测序。测序结果表明固始鸭IL-18基因全序列为610bp,包含1个完整阅读框,编码1条由200个氨基酸残基组成的多肽。序列分析发现,固始鸭IL-18基因与GenBank中两条鸭IL-18基因(AF336122和DQ490137)核苷酸同源性分别为98.8%、99.8%,与AF336122有5个碱基发生非同义变异,2个碱基为同义变异,氨基酸同源性为97.5%,与DQ490137有一个碱基发生非同义变异,氨基酸同源性为99.5%。固始鸭IL-18前体蛋白第30位谷氨酸处有一个IL-1β转换酶的caspase-1切割位点及在人和其他动物中已证实的IL-1标签序列,推测鸭IL-18成熟蛋白由170个氨基酸组成。固始鸭与人和其他动物的IL-18基因进化分析表明,IL-18基因存在着种的多样性,且亲缘关系越近,同源性越高。

摘要：根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ATCC VR-2332株GP5基因序列设计1对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增PRRSV Hn/06-1分离株GP5基因片段.将扩增片段克隆到真核表达载体pcDNA3.0中,测序后用DNAstar序列分析.构建的pcDNA-GP5重组质粒瞬时转染293T细胞,48 h后用Western-blot检测,证明GP5基因在293T细胞中获得了表达,可与PRRSV阳性血清发生特异性反应.

摘要：根据编码猪伪狂犬病病毒gH基因保守序列,设计合成一对引物,通过改进病毒核酸提取方法和优化PCR反应条件,成功的从猪伪狂犬病毒感染的细胞中扩增出预期的355bp片段,而猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒、猪瘟病毒、猪乙型脑炎病毒和正常细胞均未扩增出相应的片段,经NaeⅠ酶切鉴定,证实了该扩增片段的特异性;敏感性实验表明,该体系可检测到0.48pg的猪伪狂犬病毒DNA。本方法的建立使猪伪狂犬病病毒的检测更为快速、简便、经济、实用。