摘要：目的建立肉眼直接判读检测结果的铜绿假单胞菌OprD2耐药基因环介导等温扩增（LAMP）快速检测方法。方法对2011年12月至2012年6月西南医院微生物室收集的47株铜绿假单胞菌标本进行前瞻性研究。利用LAMP针对铜绿假单胞菌OprD2耐药基因设计两对引物，特异性识别OprD2的6个独立区域来快速扩增。通过在LAMP反应体系中加入核酸染料羟基萘酚蓝（HNB），建立可直接用肉眼判读检测结果的LAMP反应体系，并用该方法检测和分析47株铜绿假单胞菌OprD2耐药基因的分布情况及其与抗生素耐受性的相关性。结果设计出针对铜绿假单胞菌OprD2耐药基因可直接肉眼判读结果的恒温扩增检测方法，其检测体系的灵敏度为17．414μg／L，比常规PCR方法（灵敏度：174．14μg／L）高10倍。49％（23／47）的菌株OprD2基因缺失，OprD2基因缺失株的头孢噻肟、左氧氟沙星、氨曲南、哌拉西林、亚胺培南和美罗培南耐药率分别为100％（23／23）、57％（13／23）、48％（11／23）、48％（11／23）、48％（11／23）和43％（10／23）。与OprD2基因阳性株相比，OprD2基因缺失株的亚胺培南、左氧氟沙星和美罗培南耐药比例明显升高，差异有统计学意义（χ2值分别为9．155、4．846、4．037，P值分别为0．002、0．028、0．045）。结论建立了可直接肉眼判读检测结果的铜绿假单胞菌OprD2耐药基因LAMP快速技术。OprD2基因缺失导致铜绿假单胞菌以亚胺培南为主的耐药，因此明确OprD2基因分布状况有助于临床抗菌药物的选用。

摘要：对TSZ410不锈钢焊接接头进行中性盐雾试验,使用金相显微镜、扫描电镜、X射线衍射仪、能谱仪、电化学工作站以及失重分析探讨了其腐蚀行为。结果显示,经过128 d盐雾试验后,虽然母材区有明显腐蚀,但是焊缝区以及熔合区没有发现腐蚀。焊缝区的组织没有变化,表现出良好的耐蚀性。

摘要：目的针对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因扩增片段,设计一种茎环结构的DNA分子探针,运用荧光显微镜观测DNA分子探针与mecA基因扩增产物杂交后的荧光信号。方法采用Beacon designer 7.0软件对mecA基因的特异性扩增片段设计茎环结构的DNA分子探针,应用荧光显微镜检测mecA基因扩增片段与探针杂交荧光信号。结果通过荧光显微镜观测出28株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和8株铜绿假单胞菌对照菌的特异性扩增片段,与DNA分子探针杂交后,荧光信号强度差异有统计学意义;该杂交条件优化:50℃为最佳杂交温度;10 h为最佳杂交时间。结论茎环结构DNA分子探针技术,结合荧光显微镜可高灵敏检测mecA基因的扩增片段,mecA基因是金黄色葡萄球菌耐甲氧西林的主要原因。

摘要：互通式立体交叉是实现高速公路节点交通流转换的重要设施,互通式立体交叉设计的成功与否是解决交通拥堵问题的关键。以营达高速公路新店枢纽方案设计为例,在诸多限制因素的复杂条件下,综合工程规模、占用土地及环境保护等方面进行复合式互通式立体交叉方案比选,为以后同类互通方案选择提供参考。

摘要：目的应用基于非对称发夹探针的杂交链反应技术,检测肺炎克雷伯菌不对称PCR产物,建立一种新的病原菌快速检测方法。方法采用Array Designer 4.0软件,针对肺炎克雷伯菌的16SrDNA可变区域设计非对称发夹式DNA探针,优化探针浓度,以不对称PCR扩增肺炎克雷伯菌16rDNA可变区所制备的单链DNA为靶序列,采用HCR进行检测和分析。结果 HCR体系中发夹探针最佳浓度为1μmol/L;当靶序列初始浓度≥0.05μmol/L时,通过琼脂糖凝胶电泳可观察到明显的HCR聚合物;不对称PCR法制备的单链DNA可以启动杂交反应。结论应用基于非对称发夹探针的杂交链反应技术检测病原菌具有反应体系简单,无需酶促反应等优点,可对血流感染病原菌基因组进行简便、快速、特异的检测。

摘要：目的建立一种快速检测血液感染病原菌的方法。方法选取7种常见血液感染病原菌,在其16SrRNA末端和23S rRNA始端的保守区设计通用引物,对16S-23S rRNA基因间区进行扩增,然后将PCR产物的电泳图谱进行机器码识别,以鉴定病原菌。结果通用引物能扩增出7种病原菌,且每种菌具有不同片段长度(bp):大肠埃希菌(716、808),金黄色葡萄球菌(732、827),铜绿假单胞菌(833),表皮葡萄球菌(630、722、817),肺炎链球菌(606),肺炎克雷伯菌(550、705、797),粪肠球菌(591、693);此图谱可经机器码识别,对各种病原菌进行快速鉴定。结论采用通用引物PCR和机器码识别技术可简便、快速、特异地鉴定常见血液感染病原菌。

摘要：目的研究毛细管-单链构象多态性(capillary electrophoresis-single strand conformation polymorphism,CE-SSCP)分析技术鉴定血液感染病原菌的可行性,并建立一种快速检测病原菌的新方法。方法选取7种常见血液感染病原菌,在其16S rRNA的保守区设计通用引物,对16S rRNA基因进行扩增,然后将PCR产物进行CE-SSCP分析,依靠CE-SSCP图谱来鉴定病原菌。结果通用引物能够扩增出7种病原菌;CE-SSCP分析后每种菌具有不同出峰时间:大肠杆菌(3999);金黄色葡萄球菌(4082);铜绿假单胞菌(3958);表皮葡萄球菌(4063);肺炎链球菌(4055);肺炎克雷伯菌(3980);粪肠球菌(4166)。结论采用毛细管电泳-单链构象多态性分析技术可简便、快速地鉴定常见血液感染病原菌。

摘要：目的探讨建立一种基于毛细管电泳-单链构象多态性(CE-SSCP)技术的血液感染病原菌快速检测方法。方法选取常见血液感染病原菌,查询其基因组序列,在其保守区域设计通用引物进行PCR扩增,然后进行CE-SSCP分析,测定不同病原菌所对应的出峰时间及不同浓度的PCR产物所对应的峰面积;用标准菌株建立各菌的CE-SSCP特异图谱,用临床菌株进行验证;以大肠埃希菌为研究对象,挑取浓度为10～108 CFU/ml的菌液,研究该方法的最低检出浓度。结果所设计引物能够成功扩增所研究的6种病原菌,电泳中未见明显引物二聚体和非特性条带;CE-SSCP分析显示,6种菌的出峰时间各不相同,金黄色葡萄球菌为4082、大肠埃希菌为3999、铜绿假单胞菌为3958、表皮葡萄球菌为4063、肺炎克雷伯菌为3980、粪肠球菌为4166、肺炎链球菌为4055;不同浓度的PCR产物对应不同大小的峰面积,浓度>10ng/L是两者呈良好的线性关系;CE-SSCP法最低可检测18CFU/ml的菌液。结论利用CE-SSCP技术检测血液感染病原菌快速、灵敏,而且不受抗菌药物影响,尤其适合对难培养菌的检测,可以与传统方法互补。

摘要：目的构建一种压电石英晶体微天平(QCM)DNA传感器多聚T尾型探针敏感膜制备新方法,同时对其重要影响因素进行优化探讨。方法设计一种多聚T尾型探针,固定在压电QCM DNA传感器晶振表面,对探针固定浓度、杂交温度和杂交时间等因素进行实验研究,进一步将构建的多聚T尾型探针DNA传感器和普通探针DNA传感器用于铜绿假单胞菌检测,比较两种传感器的频率响应性能,同时对该压电QCM DNA传感器的再生性能进行研究。结果探针最佳固定浓度为2.0μmol/L,最适杂交温度为40℃,最适杂交时间为90min;多聚T尾型探针DNA传感器的响应性能显著大于普通探针DNA传感器(P<0.05),可以重复使用7次。结论基于多聚T尾型探针的压电QCM DNA传感器,具有杂交效率高、技术难度低、频率响应性能高等优点,在压电QCM DNA传感器基因检测领域有较好的应用前景。

摘要：中国古典园林是中国文化长期积累的艺术结晶,其造园风格"本于自然,又高于自然",把人工美与自然美巧妙结合,从而取得"虽由人作,宛自天开"的效果。该文主要分析了"一池三山"园林模式的形成与发展,探讨了其文化根源,同时对该模式的布局、空间特征进行了探索。