摘要：活动背景游戏是幼儿喜闻乐见的活动,也是幼儿园的基本活动。音乐游戏是幼儿游戏活动的一种,它将音乐与游戏相融合,让幼儿在游戏中感受、理解、表现音乐,陶冶幼儿情操。歌曲《开锁》生动形象、易学易唱,容易被幼儿接受和理解。我班的幼儿进入中班后自主性、积极性、规则意识明显增强,且积累了一定的音乐素养。因此设计活动时,我将游戏融入其中,既通过代入歌词提问、幼儿操作的方式理解歌词内容,又让幼儿在师幼互动、幼幼互动中边游戏边学唱歌曲,体验游戏的快乐。

摘要：目的有研究显示Eph B4在肿瘤发生发展中的作用与其配体Ephrin B2密切相关。文中主要通过慢病毒介导的RNA干扰技术干扰结肠癌细胞中Eph B4基因的表达,观察Eph B4基因表达改变对其配体Ephrin B2表达的影响。方法根据Eph B4基因序列设计并合成3对miRNA的oligo DNA,退火形成双链后与pc DNA6.2-GW/Em GFP-miRNA载体相连并瞬时转染HEK293细胞,通过荧光显微镜、q PCR筛选出干扰效率最高的质粒,将其与中间载体p DONR221和慢病毒载体p Lenti6/V5-DEST连接构建慢病毒表达载体p Lenti6/V5-DEST-Eph B4。用脂质体将慢病毒载体以及包装质粒(p LP1、p LP2和p LP/VSVG)共转染293FT细胞,收集上清Lenti-miR-Eph B4感染HEK293细胞株进行滴度鉴定。将获得的病毒液感染人结肠癌细胞株,通过荧光显微镜和q PCR检测结肠癌细胞中Eph B4及其配体Ephrin B2的表达变化。结果测序结果表明3对干扰载体SR1、SR2、SR3序列与参考序列一致,成功转染HEK293细胞后,各转染组细胞荧光显微镜下均可见到绿色荧光蛋白表达;q PCR显示载体SR-3的沉默效率最高;构建出来的慢病毒载体p Lenti6.3/V5-DEST-miR-Eph B4在293FT细胞中包装成功,所得慢病毒滴度为7×108TU/m L;Lenti-miR-Eph B4浸染后,SW480和Caco-2中Eph B4 mRNA相对表达量(0.49±0.02、0.62±0.04)均较原始SW480(1.00±0.00)和Caco-2降低(1.00±0.00),差异有统计学意义(P=0.000);SW480中Ephrin B2 mRNA表达量F(2.11±0.04)较原始SW480(1.00±0.00)明显升高(P=0.000);而Caco-2细胞中Ephrin B2 mRNA表达无明显改变(1.01±0.02),差异无统计学意义(P=0.315)。结论靶向Eph B4的慢病毒干扰载体能够有效降低SW480及Caco-2细胞中Eph B4 mRNA表达水平。Eph B4与其配体Ephrin B2之间的相互作用可能受到多种因素调控,有待后续深入研究。

摘要：目的探讨脂肪肉瘤中DDIT3荧光原位杂交(FISH)分离探针判读陷阱及其意义。方法收集DDIT3端粒侧信号簇状扩增的脂肪肿瘤18例,回顾其HE形态、免疫组织化学及临床病理资料,加做MDM2、CDK4扩增FISH检测,结合临床资料、形态学、免疫学、分子结果对其重新诊断。结果18例DDIT3端粒侧信号扩增的脂肪肿瘤均应诊断为高分化脂肪肉瘤或去分化脂肪肉瘤,其MDM2、CDK4基因扩增FISH结果均为阳性。对照说明书探针设计细节并辅以MDM2、CDK4基因扩增FISH实验论证,发现DDIT3分离双色探针位于DDIT3基因两侧,均不覆盖DDIT3基因本身,而DDIT3基因及CDK4基因都位于第12号染色体长臂,距离很近,DDIT3分离探针的端粒侧探针覆盖CDK4基因;因此,当DDIT3分离探针不出现红绿信号分离结果,而覆盖CDK4基因的端粒侧信号出现簇状扩增,不能提示DDIT3基因存在异常,无法支持黏液样脂肪肉瘤/圆细胞脂肪肉瘤的诊断,反而能提示CDK4基因存在扩增改变,因此可支持高分化脂肪肉瘤/去分化脂肪肉瘤的诊断。结论基于临床工作观察,发现脂肪肉瘤中DDIT3 FISH分离探针判读存在陷阱,可能对脂肪肉瘤诊断产生误导。

摘要：目的 对Xp11.2易位/TFE3基因不同融合类型设计多重PCR引物,证实多重PCR联合Sanger法测序的可行性,旨在探讨引物设计的重要性.方法 选取已通过高通量RNA-Seq测序证实TFE3融合类型的标本23例,其融合类型包括PSF-TFE3 3种,PRCC-TFE3 3种,ASPL-TFE3 2种, FUBP1-TFE3 1种,NONO-TFE3 2种,RBM10-TFE3 1种,MED15-TFE3 1种以及MATR3-TFE3 1种共计14种,对其用设计好的多重PCR引物进行PCR扩增并联合Sanger法测序进行验证,该次实验分4个多重PCR反应,包括14条不同基因的正向引物以及4条TFE3反向引物.结果 23例标本均与高通量RNA-Seq测序结果完全一致,可见所设计的引物通过多重PCR联合Sanger法测序是可行的.结论该方法的优势在于利用4个多重PCR反应便可确定是否存在上述14种TFE3融合类型阳性,并通过反向测序便可确定具体融合类型.因此从试剂成本方面考虑,尤其在大批量标本的TFE3融合类型筛查过程中,该方法较高通量RNA-Seq测序有很大的优势.