摘要：在大肠杆菌系统中表达重组HPV16 L1衣壳蛋白,并采用实验设计(design of experiments,DOE)对重组蛋白的阳离子交换层析纯化工艺参数进行优化,以获得更高的回收率,为产品生产提供指导。首先,构建表达载体pET-30a-16 L1,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,进行诱导表达并应用50 L发酵罐高密度培养工程菌;然后,单因素变量筛选4种阳离子交换层析介质,DOE方法优化上样流速及缓冲液的pH,疏水层析进一步纯化;分析重组HPV16 L1病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)的蛋白纯度、回收率、内毒素、宿主残余蛋白和残余DNA,并进行透射电镜形态观察;最后,HPV16 L1 VLPs免疫小鼠,评价体内所诱导的中和抗体水平。结果显示,筛选并确定pH为8.0的缓冲体系和5 mL/min的上样流速进行POROS^(TM)XS阳离子层析作为蛋白纯化条件,疏水层析进一步纯化;纯化后蛋白浓度为1.0 mg/mL,回收率为46.23%,纯度为97%,内毒素含量小于12.5 EU/mL,宿主残余蛋白为6.00 ng/mL,宿主残余DNA为3.30 ng/mL;小鼠免疫6周后血清的中和抗体滴度Log10平均值为4.01。本研究利用大肠杆菌表达系统成功表达HPV16 VLPs,获得优化后的阳离子交换层析纯化工艺,为VLPs疫苗的研发提供了思路,为DOE在生物工程领域的应用提供依据。

摘要：以金刚烷苯乙烯为结构单元,设计合成了3个含有亲水性基团的新型小分子(8a、8b和8c),利用核磁共振谱、红外光谱和高分辨质谱等技术手段对其进行了结构表征。用1-溴代金刚烷作为原料在Pd/C和K2CO3的作用下发生傅克烷基化反应高产率得到金刚烷甲苯(2),随后在N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)和(三苯基膦烯基)乙酸甲酯过氧化苯甲酰(BPO)的作用下发生溴代反应得到了金刚烷苄基溴的化合物3,苄基溴在酸性条件下氧化生成醛(4),该醛与维蒂希试剂发生Wittig反应得到甲酸甲酯(5),随后发生碱性条件水解得到重要的中间体6。最后该中间体与3个结构不同的苯胺类化合物发生偶联反应生成了3个目标化合物。通过MTS法评价了3个化合物对人肝癌细胞(SMMC7721)、乳腺癌细胞(MCF-7)、宫颈癌细胞(Hela)、肺癌细胞(A549)的增殖抑制活性。结果表明,部分化合物表现出较好的抑制活性。其中,目标化合物8c对人肝癌细胞表现出较好的抗肿瘤活性(IC_(50)=1.6μmol/L或0.73 mg/L),与现有药物阿霉素相当(0.44 mg/L),有望成为潜在的抗肿瘤药物分子。该类化合物可能在靶向抗肿瘤药物研发方面具有较好的研究前景,所合成的金刚烷苯乙烯类衍生物的抗肿瘤活性、靶点及作用机制还有待进一步研究。