摘要：【目的】建立新疆林木腐烂病菌的快速PCR检测方法,为新疆林木腐烂病的早期测报和防治提供技术依据。【方法】针对新疆林木腐烂病菌主要种苹果黑腐皮壳(Valsa mali),污黑腐皮壳(***),Leucostoma niveum和***的r DNA-ITS特异性区段设计属专化型引物和种特异性引物。【结果】属专化型引物VF/VR可以从腐烂病菌中扩增一条424 bp的条带,检测灵敏度为10 pg/m L;设计的4对种特异性引物分别可对4种腐烂病菌***,***,***,***检测到263 bp、423 bp、307 bp、308 bp的条带,检测灵敏度均为10 pg/m L。【结论】采用腐烂病菌Valsa的r DNA-ITS特异性区段设计的引物及PCR方法,可用于新疆林木腐烂病的快速分子检测。

摘要：根据已知的番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)CCD7和CCD8基因的序列设计特异性引物,采用RT-PCR克隆CCD7和CCD8基因片段,通过特定酶切将2个基因进行拼接,再将串联基因以反向重复的方式连入p UCCRNAi载体,并定向插入到p35植物表达载体上。结果表明,克隆获得了大小约为400 bp的CCD7和CCD8基因片段,基因片段拼接后获得800 bp左右的串联片段CCD7-8;将该基因片段插入p UCCRNAi载体后得到1 700 bp大小的含Intron的反向重复序列In-7-8,并成功插入到植物表达载体p35中,通过酶切分析,RNAi载体构建正确。最终成功构建了番茄CCD7和CCD8 2个串联基因的RNA沉默表达载体p35-In-7-8。