摘要：目的 探讨用于快速产前诊断的多重荧光定量PCR（QF-PCR）方法的建立并评价其临床应用价值.方法 2008年5月到2009年7月在北京协和医院产前诊断中心进行产前诊断的孕妇170例,其中收集羊水123例,新鲜绒毛9例,脐血20例,自然流产绒毛18例.孕妇均为汉族,平均年龄（34.1±4.6）岁,平均孕周为（19.6±1.0）周.采用基因组DNA提取试剂盒提取羊水、绒毛及脐血标本中DNA.采用3种荧光素标记的引物,针对人类染色体中的短串联重复序列（STR）位点参照基因库（GenBank）和文献资料设计并合成20对引物,其中21号染色体6对引物,18号染色体4对引物,13号染色体4对引物,X和Y染色体1对通用引物,另有X染色体4对引物,Y染色体1对引物.设计检测方案为每份标本均进行两套8重QF-PCR（8×QF-PCR）,共检测21、18、13号染色体及性染色体各4个位点;如果无法达到诊断要求,再追加第3套4个位点.同时与染色体核型分析结果进行对照.结果 （1）核型分析：170例标本均成功进行了核型分析,其中正常核型151例（89%,151/170）,异常核型19例（11%,19/170）.（2）QF-PCR检测：170例标本中,QF-PCR成功检测167例（98%）,失败3例,QF-PCR检测均在2～3 d得出结果.QF-PCR检测结果正常134例,均与核型分析结果一致;核型分析异常的19例中,QF-PCR检测出异常18例（其中8例21三体及3例18三体）.167例QF-PCR成功检测标本中,第1套＋第2套引物组合共确诊150例（90%,150/167）,加用第3套引物组合共检测3例（2%,3/167）,另有14例不提供信息（8%,14/167）.（3）QF-PCR诊断效率：QF-PCR用于常见非整倍体异常产前诊断的敏感度为95%（18/19）,特异度为100%（134/134）,假阳性率0（0/134）,假阴性率5%（1/19）,阳性预测值为100%（18/18）,阴性预测值为99%（134/135）.（4）QF-PCR检测常染色体及性染色体结果：21号常染色体STR位点中D21S1270和D21S1411杂合度最高,性染色体中DXS8377杂合度最高,扩增较稳定.结论 多重QF-PCR技术能成功用于常见非整倍体异常的快速产前诊断,检测结果准确,适合于规模较大的产前诊断中心进行大样本检测.

摘要：目的 总结分析2例多种硫酸酯酶缺乏症患儿的临床表现、硫酸酯酶活性及硫酸酯酶修饰因子1（SUMF1）基因的突变情况.方法 2例患儿中例1男,5岁6个月；例2女,5岁2个月,来自2个不同家系,皆因自幼发育落后,伴智力、运动、语言倒退来院就诊.二者都有面容改变、肌张力增高、腱反射亢进、巴氏征阳性、骨骼畸形及皮肤干燥脱屑等多脏器损害表现,病情进展迅速.骨骼X线提示多发性骨发育不良,尿甲苯胺蓝试验强阳性.采用荧光-人工合成底物法检测患者外周血浆或白细胞、成纤维细胞中硫酸酯酶活性；提取患儿及其父母的基因组DNA,针对SUMF1基因设计特异性引物,应用DNA-PCR方法扩增基因的全部外显子及外显子-内含子交界区,对扩增产物进行直接测序分析.结果 2例患者临床表现符合多种硫酸酯酶缺乏症,酶学检测证实患者外周血白细胞、血浆或培养的皮肤成纤维细胞中至少3种硫酸酯酶活性明显降低；SUMF1测序发现例1的基因型为c.793_794insAGT（p.F265X）/c.1045C ＞T （p.R349W）,例2的基因型为c.1046G＞C（p.R349P）/c.451A ＞G （p.K151E）.其中c.793_794insAGT、c.1046G＞C和c.451A＞G为未见报道的新突变.结论 多种硫酸酯酶缺乏症导致神经、骨骼、皮肤等多脏器损害,患者临床表现复杂,需要通过多种硫酸酯酶活性检测和SUMF1基因突变检测明确诊断.2例多种硫酸酯酶缺乏症患者的3个SUMF1突变为新突变,提示我国患者基因突变谱可能不同于其他国家.