摘要：目的构建并鉴定靶向人转录因子FOXM1基因的shRNA慢病毒载体。方法设计合成靶向人FOXM1基因的shRNA序列,通过基因重组技术将其连接到含U6启动子及绿色荧光蛋白基因的慢病毒表达载体pLL3.7中,构建shRNA重组质粒pLL-FOXM1-shRNA。重组质粒经XbaⅠ和NheⅠ双酶切及DNA测序鉴定后,与慢病毒包装质粒混合,与脂质体Lipofec-tamineTM 2000共转染至293T细胞中,孵育72 h后收集上清液,高速离心纯化病毒颗粒,并采用逐孔稀释法测定慢病毒滴度。结果双酶切鉴定及测序结果证实,靶向人FOXM1基因的shRNA序列已成功插入pLL3.7中;在293T细胞中成功包装出慢病毒颗粒,病毒滴度为1×108 TU/ml。结论 已成功构建了靶向人FOXM1基因的shRNA慢病毒载体,为进一步研究FOXM1的分子功能奠定了基础。

摘要：目的检测人端粒酶逆转录酶(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因沉默对卵巢癌细胞株A2780生长抑制和凋亡的影响,并探讨其与p53、p21基因表达激活的相关性。方法设计合成针对hTERT基因的shRNA干扰质粒,与可表达荧光蛋白的pGenesil-1.1质粒连接,构建重组质粒pG1、pG2和阴性质粒pGCR,转染A2780细胞,采用荧光定量RT-PCR检测转染细胞hTERT基因mRNA的表达,Western blot检测细胞hTERT、P53和P21蛋白的表达,TRAP法检测细胞的端粒酶活性,CCK-8法检测细胞的生长,流式细胞术分析细胞周期,AnnexinⅤ-PE/7AAD双染和TUNEL法检测细胞凋亡。结果酶切及测序结果证实重组质粒pG1、pG2和pGCR构建正确,质粒pG1和pG2转染可明显下调A2780细胞hTERT的表达水平和端粒酶活性,而上调细胞P53和P21蛋白的表达水平;沉默hTERT基因表达能够引起A2780细胞的生长抑制和G0-G1期细胞比例明显下降,并出现明显的细胞凋亡。结论针对hTERT基因的shRNA干扰质粒在体外能有效和特异地沉默卵巢癌A2780细胞hTERT基因的表达,降低端粒酶活性,并引起细胞的生长抑制和凋亡,其机制可能与抑癌基因p53及p21上调有关。

摘要：Postmenopausal osteoporosis （PMO） is considered a polygenic disease. The estrogen receptor β （ESR2） gene is a candidate mediating the genetic influence on bone mass and the risk of osteoporosis. The aim of this study is to investigate the association of a cytosine-adenine （CA） repeat polymorphism in the fifth intron of the ESR2 gene with PMO in Chinese Han population. The CA repeat polymorphism was genotyped in a case-control study, involving 78 femoral neck PMO patients vs. 122 controls and 108 lumbar spine （L2-4） PMO patients vs. 92 controls. The （CA）n〈22 and （CA）n≥22 alleles were designated short （S） and long （L）, respectively. ESR2 genotype was categorically defined as SS （2 S alleles）, SL （having the mixed S and L alleles）, and LL （2 L alleles）. At both the femoral neck and the L2-4 region, LL genotype and L allele frequencies of the PMO group were significantly higher than those of the control group （P〈0.01）. The subjects with the SL, the LL, and the combined SL and LL genotype had a significant increased risk of PMO when compared with those with the SS genotype （P〈0.05）. After adjustments for age, years since menopause, menopausal age, and body mass index, logistic regression analysis showed that the subjects with the combined SL and LL genotype had increased risk of PMO when compared with those with the SS genotype both at the femoral neck （adjusted OR 4.923, 95% CI 1.986-12.203 , P=0.001） and the L2-4 （adjusted OR 2.267, 95% CI 1.121-4.598, P=0.023）. This extensive association study has identified the ESR2 CA repeat polymorphism to be independently associated with PMO at the femoral neck and the L2-4 in Chinese Han population. The data also suggested that the presence of the L allele may dominantly increase the risk of PMO at the two regions.

摘要：目的构建人端粒酶逆转录酶(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因小干扰RNA(Small interferingRNA,siRNA)质粒,并探讨其对不同p53状态卵巢癌细胞SKOV3(缺p53)和OVCAR3(含p53)生长和凋亡的影响。方法设计并合成针对hTERT基因的siRNA,与表达的质粒pGenesil-1连接,构建重组表达质粒pG1、pG2和pGCR(阴性对照质粒),分别转染卵巢癌细胞SKOV3和OVCAR3,并设未转染细胞对照组和转染空载体对照组。转染后48 h,荧光显微镜观察并计算转染效率;实时荧光定量PCR法检测转染细胞中hTERT基因mRNA的表达;Western blot检测转染细胞中hTERT、p53和p21蛋白的表达;端粒重复序列扩增(Telomeric repeat amplification portocol,TRAP)法检测转染细胞端粒酶的活性;CCK-8法检测细胞生长情况;流式细胞仪和AnnexinⅤ-PE/7-AAD双染法分别检测细胞周期和细胞凋亡的情况。结果已成功构建了靶向hTERT siRNA重组质粒pG1、pG2和阴性对照质粒pGCR,具有较高的转染效率,与pGCR转染组相比,pG1和pG2转染组hTERT基因和蛋白表达(P<0.05)及端粒酶活性均明显降低,pG1和pG2转染组均可抑制两种细胞的生长,且对OVCAR3细胞的抑制作用强于SKOV3细胞;pG1和pG2转染组G0-G1期细胞比例明显下降,S期细胞比例明显增多(P<0.05);在OVCAR3细胞中,hTERT表达受抑后均出现了明显的凋亡,同时伴随p53和p21蛋白表达的增加,在缺乏p53基因的SKOV3细胞中并未导致明显的凋亡,其p21蛋白表达明显低于pGCR转染组(P<0.05)。结论构建的靶向hTERT siRNA重组表达质粒在体外能有效和特异地沉默卵巢癌细胞hTERT基因的表达,降低端粒酶活性,并引起肿瘤细胞的生长抑制和凋亡,其机制可能与抑癌基因p53及p21上调有关。

摘要：背景:妇女产后的性健康是生殖健康的重要部分,在中国由于性知识,性健康保健服务的缺乏,加之传统观念的影响,医务人员及妇女本人对产后性健康的关注、讨论较少。目的:了解妇女产后各种不同类型性问题的发生率、产后性交疼痛发生的相关因素以及在产后保健服务中对性健康的重视状况。设计:横断面调查,3～6个月随访。单位:重庆医科大学生殖医学系。对象:2000-11/2001-07在重庆医科大学附属第一临床学院产科分娩活胎的初产妇798名,及陪妻子来院随访的丈夫79名。方法:采用横断面调查方法,在门诊对产后6个月的初产妇及部分产妇的丈夫以面谈方式进行性健康问卷调查,并进行妇科检查及必要的心理咨询与治疗。主要观察指标:①产后性生活的主要变化。②产后性问题及其相关因素。结果:符合纳入、排除标准的初产妇共798名,通过电话或信件通知,来院接受随访调查者460名。①产后性生活的主要变化:94.7%初产妇于产后6个月内恢复性生活,与孕前1年相比,产后3～6个月内的性生活次数明显减少,有66.0%的妇女产后性欲下降。②产后性问题及其相关因素:妇女性问题的发生率较产前明显增加。其中,产后3个月内70.6%存在性问题,产后4～6个月下降为55.6%,产后6个月时降至34.2%,但未恢复到妊娠前(7.2%)的水平。产后常见的女性性问题有性交疼痛、阴道干涩、性高潮障碍、阴道松弛等;其中,性交疼痛发生率占第1位。产后4～6个月内,性交疼痛与当前是否正在哺乳、传统性观念及孕前性交疼痛史明显相关,而与分娩方式无显著关系。③性保健服务及妇女产后性咨询情况:产后42d接受产科随访时,仅20.8%的妇女从卫生保健人员得到有关的性健康知识。在有产后性问题的妇女中,与卫生保健人员讨论过该问题者仅为8.0%。④丈夫对妇女产后性问题的了解情况:有59.2%的丈夫知道妻子有产后性问题,但仅有8.1%的丈夫曾就此问题进行过医学咨询。结论:产后性健康问题发生率为70.6%,产后性生活质量与分娩方式无关,但产后保健服务中性健康未得到应有重视,更缺乏专业人员提供咨询与治疗,产后保健中男方的参与有利于妇女产后性问题的预防和治疗。

摘要：目的　了解妇女产后各种不同类型性问题的发生率以及产后性生活的变化。方法　采用横断面研究方法 ,以自行设计的《女性产后性健康调查表》 ,调查 2 0 0 0年 11月至 2 0 0 1年 7月在重庆医科大学附属第一医院产科分娩活胎的 4 6 0例初产妇 ,分析其产后 6个月性健康情况。结果　 94 74 %初产妇于产后 6个月内恢复性生活 ,但妇女性问题的发生率明显增加。其中产后 3个月内 ,70 5 9%的妇女存在性问题 ,产后 >3～ 6个月降为5 5 6 3% ,产后 6个月后降至 34 17% ,但未恢复到妊娠前 (7 17% )水平。产后妇女性生活的常见改变有 :性欲减退、性生活频率下降 ,性生活满意度和女方主动率明显降低。产后常见的女性性问题中 ,性交疼痛占第一位 ,产后3个月内发生率为 6 1 76 % ,产后 6个月后发生率为 13 2 1%。结论　产后性健康问题普遍存在 ,重视和研究性健康这一妇产科领域中重要而尚不完备的问题是目前紧迫的任务。