摘要：乳铁蛋白是乳中特有的一种新型抗菌、抗癌成分,具有广谱抗菌、消炎、抑制肿瘤细胞生长及调节机体免疫反应等作用。本试验以牛乳铁蛋白肽为基础,以对称结构理念设计的新抗菌肽FP-PF为试验对象,并以蜂毒素作为阳性对照肽,研究新型抗菌肽FP-PF的细胞毒性、溶血活性及抑菌机理。试验研究表明,在浓度1~256μmol/L范围,FP-PF的溶血率都小于5%,表明其溶血率较低;细胞存活率大于92%,表细胞毒性较小。抑菌机理研究表明,抗菌肽FP-PF能破坏细胞外膜和内膜,改变细胞渗透压和完整性,从而达到杀菌和抑菌的效果。本试验设计的新型抗菌肽FP-PF有望在食品及化妆品等领域中应用。

摘要：本文用数学计算法对超声波横波检测中的声束宽度做了定量的近似计算。讨论了该项工作与探头设计的关系．注意到了在探头设计不正确时，会导致非均匀平面波的出现。

摘要：以牛乳铁蛋白肽片段LFcinB18-28为母肽,在保留其高电荷、强疏水性的基础上,依据对称结构设计理念,引入精氨酸和色氨酸替换,设计出新型抗菌肽KWRRWQWRRWK-NH2(KW-WK)。采用圆二色谱法、微量稀释法、噻唑蓝法等方法分析KW-WK的二级结构、抑菌活性、溶血活性、细胞毒性及稳定性。结果表明,KW-WK肽在模拟水环境中呈无规卷曲状,在模拟细胞膜环境中,则呈α-螺旋结构;KW-WK肽的抑菌性强,最小抑菌浓度为4～128μmol/L;溶血率低,当肽浓度为256μmol/L时,其溶血率小于5%;细胞毒性小;治疗指数为9.14,细胞选择性高;热稳定性好,100℃处理1 h后仍保持较强的抑菌活性,酶稳定性较LFcinB18-28母肽有极大的提高。因此,新型抗菌肽KW-WK在食品、医药和畜牧等领域都显示出巨大的应用潜力。

摘要：本试验目的是建立一种基于16SrRNA基因检测猪嗜血支原体的PCR方法。根据GenBank上猪嗜血支原体16S rRNA基因(ID:U88565)设计特异引物,对哈尔滨采集病料进行PCR并克隆pMD18-T,测序所扩增的片段为411bp,同源性分析表明,该序列与参考序列同源性97.57%。特异性和敏感性试验表明,所建立的PCR诊断方法对猪肺炎支原体、大肠杆菌、沙门菌、葡萄球菌无交叉反应;血液基因组DNA最小检出量为0.75fg/μL。该方法具有快速、特异、敏感等特点,为猪嗜血支原体病的快速诊断及流行病学调查提供了新的手段。

摘要：为加强对猪源伪狂犬病病毒（pseudorabies virus,PRV）的监测,在PRV gB基因的保守区设计特异性引物,并建立了检测猪源PRV的实时定量PCR。该方法可检测PRV的最低TCID50为2×10^1/mL,比伪狂犬病诊断技术国家标准中的PCR方法敏感100-1 000倍,且特异性、重复性好。利用该方法测定了PRV SC株在感染Vero细胞后的复制动态;结果显示,PRV在感染后第12小时进入复制高峰期,在感染后第24小时达到平台期。本方法具有快速、敏感和重复性好等特点,能够为研究病毒的复制动态或临床样品的检测提供技术支持。

摘要：为检测高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染的猪胸腺中凋亡相关因子的变化,本研究针对猪TNF-α、TNFR1、FasL、Fas、Bax、Bcl-2、caspase-3基因及内参β-actin基因设计特异性引物,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测TNF-α、TNFR1、FasL、Fas、Bax、Bcl-2、caspase-3基因的SYBR Green I qRT-PCR方法。结果显示,该方法线性关系好(R2≥0.998),敏感性高,初始模板的检出下限为10拷贝/μL;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性好,批内、批间重复试验的变异系数均小于3%,具有良好的重复性。本研究为细胞凋亡相关因子变化趋势的研究提供方法。

摘要：为建立猪相关细胞因子的检测方法,本研究针对GenBank中猪IFN-γ、IL-2、TNF-α的基因设计特异性引物和荧光探针,建立了这3种细胞因子TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法。结果表明,建立的检测方法在101～109拷贝/μL模板范围内具有良好的线性关系,相关系数R2均高达0.999。利用该方法对猪瘟(CSF)活疫苗进行细胞免疫评价,结果显示,CSF疫苗免疫组猪瘟病毒(CSFV)刺激细胞相对于空白对照细胞,IFN-γ、IL-2、TNF-αmRNA表达量在免疫后3 d～10 d之间均显著升高(p0.05)。以上结果表明,该方法具有高度的特异性、敏感性和重复性,对不同疫苗的细胞免疫反应评价是可靠的。

摘要：为了验证双向电泳筛选出的7型猪链球菌WH分离株免疫相关蛋白乳酸脱氢酶的反应原性,本实验采用克隆表达的方法对其进行研究。根据质谱鉴定的NCBI登录号查找乳酸脱氢酶基因序列,并设计特异性引物,对乳酸脱氢酶基因进行扩增,克隆入p ET30a载体,构建重组质粒p ET30a-LDH,测序后转化入大肠埃希氏菌中。用IPTG进行诱导重组菌,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。SDS-PAGE分析结果显示表达的重组融合蛋白相对分子量为41ku;Western blot分析结果显示该重组蛋白可与7型猪链球菌WH分离株多克隆抗体发生特异性血清学反应。这表明表达的重组LDH蛋白具有良好的反应原性,为预防和控制猪链球菌病提供有效的疫苗候选分子奠定基础。