摘要：以南瓜自交系北观(Cucurbita maxima)为材料,利用正交设计L16(4^5)优化南瓜MSAP预扩增和选择性扩增体系的主要因素。结果表明,第一步最佳酶切时间2 h,HapⅡ(HpaⅡ,MspⅠ)用量0.5μL;第二步酶切时间6 h,EcoRⅠ用量0.4μL;连接体系包括酶切产物21μL,EcoRⅠ接头(5μmol·L^-1)、HapⅡ接头(5μmol·L^-1)各1.0μL,连接时间12 h,T4 DNA Ligase用量为0.5μL;最佳预扩增反应体系(25μL)包含2.0μL连接产物,1.5μL 10×PCR Buffer(Mg^2+plus),2.0μL dNTP(2.5 mmol·L^-1),0.6μL Taq酶(5 U·μL^-1),0.4μL上下游引物(10μmol·L^-1);最佳选择性扩增反应体系为预扩增产物稀释120倍的模板4.0μL,其他同预扩增体系。最后,利用建立好的MSAP体系进行6%聚丙烯酰胺凝胶电泳验证并筛选出适于南瓜MSAP分析的36对引物,表明优化后的MSAP体系多态性好,体系稳定,可重复,为后续进行南瓜MSAP分析奠定了基础。

摘要：为建立菜用大黄最佳的SRAP反应体系,进一步对菜用大黄品种进行遗传多样性分析,以菜用大黄基因组DNA为模板,采用单因素与正交设计相结合的方法,对SRAP-PCR扩增体系中的模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物和Taq DNA聚合酶浓度5个因素进行优化,并确立菜用大黄SRAP-PCR的最佳体系。结果表明:菜用大黄各因素对反应体系影响大小依次为:引物浓度>Mg2+浓度>dNTPs浓度>Taq DNA聚合酶浓度>DNA用量;最佳反应体系为:25μL反应体系中含10×PCR Buffer 2.50μL、模板DNA 30 ng、Mg2+2.50 mmol/L、dNTPs 0.25 mmol/L、Taq DNA聚合酶0.04 U/μL、上下游引物各0.5μmol/L。用8个菜用大黄品种DNA样品对优化的反应体系进行验证,均获得了条带清晰且多态性较好的扩增图谱,证实了该体系的稳定性和可靠性,可用于菜用大黄的遗传多样性分析。

摘要：本文根据GenBank中扩展蛋白序列设计特异引物,从萝卜高代自交系"NAU-LVYH06"中克隆到一个扩展蛋白基因RsEXPB1(GenBank accession ***387363,GQ387364)。其编码区基因组序列长度为1430bp,包括4个外显子和3个内含子;RT-PCR获得长度为898bp的cDNA,开放读码框(ORF)为29～820bp,推导编码263个氨基酸,含有1个组氨酸(His-Phe-Asp,HFD)功能域,ORF和推导蛋白序列与拟南芥AtEXPB3(GenBank accession ***118965)同源性分别为87%、92%。半定量RT-PCR检测到该基因主要在萝卜生育前期的幼叶、肉质根木质部和韧皮部中表达,且表达丰度可能与该部位细胞生长分裂状态相关,差异较明显。