摘要：为分析2012年河南省猪流行性腹泻病毒（PEDV）的遗传变异情况，本研究设计合成2对扩增s1基因的特异性引物，利用RT—PCR方法，对2012年分离的5株PEDV毒株的S1基因进行扩增、克隆和序列测定，并对其进行遗传进化分析。结果表明，5株PEDVs1基因核苷酸和氨基酸同源性分别为98．3％～99．5％和97．1％～98．9％；与2011年以来国内登录的PEDV流行变异株核苷酸同源性为88．6％～98．0％，氨基酸同源性为85．3％～98．7％；与经典毒株cV777核苷酸同源性为88．7％～89．1％，氨基酸同源性为87．3％～88．4％。5株分离株s1基因均存在相同的插入和缺失，与2011年以来国内登录的流行变异毒株相比没有大的变异，但与参考毒株CV777相比，在163l66bp处有3个核苷酸插入；在l73l74bp之间有9个核苷酸插人；在405—406bp之间有3个核苷酸插入；在463464bp之间有3个核苷酸缺失，这些位点核苷酸的插入和缺失导致了其编码的氨基酸相应改变。s1基因系统进化树分析结果表明，5株分离株与2011年以来国内登录的流行变异毒株均属于基因Ⅲ群，与2011年国内登录的少部分PEDV基因Ⅰ群流行毒株的核苷酸同源性为88．6％～89．3％，氨基酸同源性为85．3％～86．9％，而经典毒株CV777所在分支群属于基因Ⅱ群。本试验结果表明，2011年以来，中国流行的PEDV毒株中同时有基因Ⅲ和Ⅰ群的存在，但以基因Ⅲ群毒株为主，其致病性和抗原性差异仍有待进一步研究。

摘要：据GenBank登录的高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(highly and lowly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP/LP-PRRSV)的非结构蛋白2(Nsp2)基因序列设计特异性引物和TaqMan MGB荧光探针,经优化反应条件,建立鉴别HP/LP-PRRSV二重TaqMan MGB实时荧光定量RT-PCR(Real-time fluorescent quantitative RTPCR)检测方法;对该二重实时荧光定量RT-PCR方法进行了敏感性、特异性和重复性试验;对疑似PRRSV感染临床样品进行了应用检测,同时与建立的HP/LP-PRRSV二重RT-PCR方法进行了对比试验。结果显示,成功建立了鉴别HP/LPPRRSV的二重实时荧光定量RT-PCR检测方法,HP/LP-PRRSV标准曲线的循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数分别为0.998和0.997;该方法灵敏度可达101拷贝/μL;特异性高,对HP/LP-PRRSV阳性对照扩增呈阳性反应,而对5个对照病原均呈阴性反应;不同浓度的HP/LP-PRRSV重组质粒分别重复扩增3次,重复结果良好;对25份临床疑似PRRSV感染样品进行了应用检测,阳性检出率为92%,较普通二重RT-PCR方法阳性检出率高。