摘要：目的建立检测新疆喀什地区羊肝组织中细粒棘球绦虫的分子生物学方法,提高包虫病的早期诊断水平。方法对羊肝组织内获取棘球蚴囊,将囊内容物离心沉淀提取DNA,以细粒棘球绦虫线粒体cytochrome b基因为靶基因设计引物进行PCR扩增,引物设计考虑简并碱基。结果建立的简并引物q-PCR法特异性好,与常见的宿主动物(羊、驴和犬)基因组无交叉扩增现象,与肝内的常见寄生虫(肝片吸虫和莫尼茨绦虫)基因组无交叉扩增。梯度稀释的基因组DNA:10 ng、1 ng、100 pg、10 pg进行qPCR实验均能得到标准的S型曲线。PCR体系R^(2)=0.984,效率:92.6%,符合qPCR的相关要求。结论线粒体基因组的cytochrome b基因分析是棘球蚴病诊断和分型的有力工具。喀什地区首次应用简并引物q-PCR法检测细粒棘球绦虫,灵敏度高,特异性好,为下一步对该地区进行包虫病分子流行病调查提供了技术支撑。

摘要：目的依托广东省临床病理质量控制中心分子病理组对广东省内医院开展的荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)方法检测HER-2基因进行室间质控,全面了解HER-2基因检测的标准操作程序(standard operating procedure,SOP)的关键节点,以更好地指导乳腺癌靶向治疗。方法选择HER-2不同阳性模式的石蜡切片作为质控片,同一表达模式病例采取连续切片,首尾2张各做FISH检测以确保质控片质量的一致性。各参加实验室采用各自的荧光原位杂交法,根据实际情况选择相应的探针和消化酶等。质控结果由质控小组成员采取双盲形式进行结果判读。结果从我省参与HER-2基因检测质控的26家实验室汇报的结果来看,各实验室使用的试剂均为国家食品药品监督管理总局批准的试剂,3种试剂探针本身对质控结果的影响无明显差异;个别实验室仍存在一些细节操作及判读的问题,其中标本(1)结果吻合率96.15%,一家单位误判为簇状扩增,标本(2)结果吻合率84.62%,标本(3)结果吻合率100%;消化液使用了胃蛋白酶和蛋白酶K,2种酶的消化效果无特别明显差异,对质控片进行镜下观察发现有2家单位4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)通道下轮廓显示不清,提示存在消化过度的问题。结论各实验室应严格按照各实验室操作流程,保证染色过程中的温度、缓冲液及清洗液的浓度和p H值、探针的配置等参数准确。只有通过不断健全室间质控系统,科学设计基础与临床实验流程步骤和评价标准,配合孰知各项实验内容的检测团队,定期进行监查活动,才能确保提高我省HER-2检测的准确性和一致性。