摘要：目的获得印度尼西亚食蟹猴的干扰素-γ基因,为常用实验猕猴干扰素-γ的基因工程生产奠定基础。方法根据GenBank上公布的恒河猴干扰素-γ基因序列设计特异性引物,从印度尼西亚食蟹猴的外周血液中分离单核淋巴细胞,利用Trizol试剂,提取淋巴细胞的总RNA,通过RT-PCR的方法获得干扰素-γ基因片段,并对该片段进行克隆、鉴定和序列分析。结果扩增到一498bp的目的片段,经序列测定证实为印度尼西亚食蟹猴的干扰素-γ基因,与恒河猴、人及狒狒的干扰素-γ基因相比,同源性分别为100%、96%、99%。结论常用的两种实验猕猴食蟹猴与恒河猴的干扰素-γ基因完全相同。

摘要：目的构建最有效的慢病毒介导RNAi干扰序列,未来将应用于比格犬ERβ419的未知生物学功能的探索。方法模拟比格犬ERβ419靶细胞筛选针对目的基因mRNA设计的最佳干扰序列实验,通过qRT-PCR和Western Blot技术筛选最佳沉默表达载体序列。结果qRT-PCR结果显示,ERβ419-shRNA1(P<0.01)和ERβ419-shRNA3(P<0.01)的差异表达极显著,Western Blot结果与qRT-PCR结果一致,ERβ419-shRNA3的干扰效果最佳。结论 ERβ419-shRNA3最有效地抑制了目的基因的表达,未来将应用于探索比格犬ERβ419未知生物学功能对比格犬生殖系统影响的研究,并进而预防和治疗比格犬繁殖机能障碍性疾病。

摘要：目的对比格犬雌激素β受体的新剪切体进行克隆与鉴定。方法以比格犬垂体组织为模板,用RT-PCR方法从垂体组织中扩增雌激素β受体,电泳确定新剪切体的存在情况.并对其进行克隆和序列测定.结果利用设计的引物得到2条明显电泳条带,通过测序表明其中一种为新的可变剪切体,目前此可变剪切体尚未见报道。结论得到了雌激素β受体的一种新的可变剪切体,有助于研究雌激素β受体可变剪切体的功能及其在生殖调控过程中的作用。

摘要：目的获得自然杀伤(NK)细胞缺陷的小鼠动物模型,并研究溶酶体运输调节因子(Lyst)基因的功能。方法采用CRISPR/Cas9技术敲除C57BL/6小鼠的Lyst基因:针对小鼠Lyst基因编码区第50个外显子,设计CRISPR/Cas9靶点引物(sgRNA),并重组构建pUC57-Lyst-sg RNA载体。将重组质粒体与Cas9质粒分别利用T7 RNA聚合酶体外转录为mRNA,并按比例显微注射入小鼠受精卵,将受精卵移植到受体动物。获得子代小鼠后,利用PCR扩增和测序方法筛选Lyst基因发生改变的动物个体。结果显微注射移植后获得7只F0代基因敲除小鼠,且毛色均发生了明显的变化。结论利用CRISPR/Cas9技术可以构建Lyst基因缺陷小鼠,外观表型与已有的文献报道一致。

摘要：目的筛选用于比格犬ERβ基因RNA干扰实验的细胞和检测所用引物。方法根据比格犬ERβ氨基末端区域和DNA结合区设计三对引物,用阳性质粒筛选最佳引物应用于RNA干扰效果检测,并利用293T、Hela和vero细胞的cDNA验证该引物的特异性。对这三种细胞内人ERβ基因的存在情况也进行了检测。结果经过三次重复性实验之后,结果显示引物C36684扩增效率高,且没有非特异条带,该引物对293T、Hela和vero细胞cDNA扩增时同样没有非特异性条带,但293T细胞中存在人的ERβ基因。结论引物C36684用于检测RNA干扰效率,而Hela细胞则作为RNA干扰实验的细胞工具。

摘要：目的研究比格犬雌激素受体β（Estrogenreceptorβ，ERβ）及其剪接异构体在生殖调控中的功能，构建比格犬ERβ的pMAL-p5x／ERβ ***重组菌株，并进行纯化和鉴定。方法Trizol法提取发情期比格犬下丘脑总RNA，RT-PCR获得cDNA，以NCBI网站公布的比格犬ERβ基因CDS序列设计特异性引物，扩增ERβ保守区基因编码序列（16-496bp），连接原核表达载体pMAL-p5x，筛选、鉴定阳性克隆并测序。将重组质粒转化至大肠杆菌DH5α，再转化大肠杆菌BL21（DE3），用IPTG诱导表达，表达产物经经麦芽糖亲和树脂（AmylomResin）亲和层析分离纯化，并对纯化的融合蛋白进行鉴定。结果构建了pMAL-p5x／ERa480重组质粒，在DE3大肠杆菌中诱导表达出MBP-ERβ融合蛋白，SDS-PAGE显示分子量约为60000，与预期结果一致：优化了MBP-ERβ表达体系的表达条件：分别在0．2％葡萄糖，1000g／mlAmpcillin，0．1mmol／LIPTG37℃培养5h或在0．2％葡萄糖，50μg／mlAmpcillin，0．2mmol／LIPTG37℃培养3h，融合蛋白表达效果比较好。结论构建了pMAL-p5x／ERβ480原核表达重组质粒，获得了比格犬MBP—ERB融合蛋白，为犬种属特异性ERB多克隆抗体的制备及功能分析奠定了基础。

摘要：目的在比格犬下丘脑-垂体-性腺轴上筛查雌激素受体β的剪接异构体。方法针对ERβmRNA CDS序列的八个外显子,两两外显子依次组合设计引物,运用PCR法,以比格犬下丘脑、垂体、卵巢、子宫组织c DNA为模板扩增相应序列,测序后在NCBI网站比对,确定是目的基因后,用DNAMAN软件比对分析及手工校对,获得ERβ的剪接异构体。结果获得到了比格犬ERβ的四个剪接异构体,分别是第4外显子完整缺失的ERβ剪接异构体(缺失300 bp),部分第4与部分第5外显子组合缺失的两个组合型缺失的ERβ剪接异构体(各缺失334bp,265 bp),以及第七外显子完整缺失的ERβ剪接异构体(缺失181 bp)。第4外显子完整缺失的剪接异构体和第7外显子完整缺失的剪接异构体获得了全长编码序列,另两个剪接异构体为部分编码序列。结论研究获得了比格犬ERβ的四个剪接异构体,为后续研究其在比格犬生殖调控中的作用机制打下了基础。

摘要：目的对本场中国源恒河猴Mamu-B*17等位基因的存在情况进行筛查,为艾滋病动物模型的制备和疫苗效果的评价提供帮助。方法随机筛选07年出生的恒河猴101只,股静脉采取抗凝血200μL,提取基因组。根据Mamu-B*17等位基因的特异性序列设计引物,利用序列特异性引物PCR(sequence specific primers polymerasechain reaction,PCR-SSP)筛查这101只恒河猴B*17等位基因的存在情况。结果没有筛查到Mamu-B*17阳性的恒河猴,与印度源恒河猴12%的存在率有很大的差异。结论在中国源恒河猴群内,Mamu-B*17等位基因不存在或存在率极低。