摘要：孙志纯，1957年10月生于福州，毕业于福建师范大学美术学院。现为中国美术家协会会员，福建省画院副院长，国家一级美术师，福建省美术家协会常务理事，福建省美协水彩画艺委会副主任兼秘书长。

摘要：孙志纯，1957年10月生于福州，毕业于福建师范大学美术学院。现为福建省画院副院长，国家一级美术师。中国美术家协会会员，福建省美术家协会常务理事，福建省美术家协会水彩画艺术委员会副主任兼秘书长，福建省文联委员。曾任福建美术出版社副社长、编审。

摘要：目的为胰岛素抵抗及非酒精性脂肪肝(NAFLD)发病与甘油-3-磷酸酰基转移酶-4(GPAT4)后续相关研究提供肝脏GPAT4基因敲除小鼠模型。方法选择C57BL/J6雌性与雄性小鼠各10只及白蛋白启动子调控的Cre转基因(Alb-Cre)小鼠作为研究对象。采用Cre/LoxP基因打靶策略,构建基因打靶载体,引入LoxP位点,获得基因同源重组胚胎干细胞(ES);将ES植入小鼠,分别获得嵌合鼠、杂合子、纯合子小鼠。最终获得肝脏特异性GPAT4敲除小鼠。基因分型实验对第8外显子下游的loxP位点设计基因型鉴定引物,以便进行批量快速基因型分析;随机抽取3只小鼠进行解剖,从高表达GPAT4的小鼠肝脏、白色脂肪和棕色脂肪提取总RNA,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测组织中GPAT4mRNA表达;在小鼠的肝脏组织中提取总蛋白,使用蛋白质印迹法检测肝脏GPAT4表达,进一步验证肝脏GPAT4的敲除效果。结果成功组装靶向载体,且GPAT4基因位于小鼠第8号染色体;酶切分析结果显示,6条带为线性后的靶标载体,线性载体在电泳中相对分子质量最大、速度最慢;导入ES后,确认了6个潜在的靶向克隆,即2A2、2A4、2C7、2C8、2F8和2G11。基因分析结果显示,编号3、6小鼠为肝脏特异性GPAT4敲除小鼠。qRT-PCR检测结果显示,肝脏组织GPAT4特异敲除雄鼠与雌鼠的GPAT4mRNA表达量分别为0.88±0.24和0.49±0.13,低于小鼠GPAT4被loxP两侧标记(GPAT4-FLOX)的11.24±1.43和10.78±1.98,差异有统计学意义,t值分别为-22.594和-16.399,均P0.05。蛋白质印迹法检测结果显示,GPAT4-FLOX小鼠肝脏细胞内GPAT4的表达正常,而GPAT4肝脏特异性敲除小鼠的肝脏细胞内GPAT4不表达。结论成功建立了肝脏特异性GPAT4敲除小鼠模型,为后期相关研究提供可靠的动物模型。