摘要：为了探寻天然原肌球蛋白的可替代物作为诊断和治疗虾类过敏的基础材料,本研究从河虾中提取总RNA,利用cDNA末端快速扩增技术克隆河虾过敏原原肌球蛋白基因的全长序列。以此序列设计表达引物,构建表达载体,最后通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达重组原肌球蛋白。结果显示,河虾的原肌球蛋白基因cDNA序列全长1658 bp,开放阅读框855 bp,编码284个氨基酸,预测蛋白等电点4.70,预测分子质量32.8 kDa。河虾原肌球蛋白cDNA序列已上传至GenBank数据库,登录号为OP974621。本研究成功构建河虾原肌球蛋白重组表达质粒pET-30a-TM,并用IPTG进行体外诱导表达,最佳诱导条件为IPTG浓度1 mmol/L、37℃诱导4 h。可溶性分析结果表明重组原肌球蛋白主要以可溶性形式存在于细胞破碎液的上清液中,分子质量约38 kDa。

摘要：目的通过对草鱼α-烯醇化酶(α-Enolase)原核表达的条件进行优化,分别从表达的上清液与包涵体中纯化获得重组α-Enolase。方法本研究基于前期克隆的草鱼α-Enolase基因序列设计表达引物,将草鱼α-Enolase基因克隆至pET-30a质粒中,得到pET-30a-α-Enolase重组质粒。然后,将重组质粒转入大肠杆菌Origami2(DE3)感受态细胞中,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)进行体外诱导表达。采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳方法分析重组蛋白的可溶性,并对表达条件进行优化。利用亲合层析法纯化目的蛋白。结果在20℃诱导15 h得到的重组蛋白以两种形式存在:一部分为可溶性蛋白存在于上清液中,一部分以包涵体形式存在于沉淀中;在37℃诱导4h得到的重组蛋白则只有包涵体形式。包涵体蛋白表达量最大的优化条件为:诱导温度为37℃,IPTG终浓度1.0 mmol/L,诱导时间4 h。采用亲合层析法分别纯化上清液(20℃诱导15 h)和包涵体中(37℃诱导4 h)的重组蛋白,得率分别为3.5 mg/100 mL和4.9mg/100mL菌液。结论利用原核表达从上清液与包涵体中均可纯化得到重组α-Enolase。但这两种α-Enolase在生物活性与免疫原性是否存在差异性,以及通过重组α-Enolase是否可以代替天然蛋白用于鱼类过敏原的研究,有待进一步研究。

摘要：产品生命周期是指某种产品从投放市场开始,到被市场淘汰为止所经历的全过程。它包括投入期、成长期、成熟和衰退期四个阶段。企业的广告策略是为配合企业的目标市场策略、产品策略、价格策略、分销渠道策略和其它促销方式等而制定的,它必须服从和服务于企业的市场营销策略,与其保持一致。在产品生命周期的各个阶段,由于市条件和产品销售特点产不同,广告的侧重点和方式也应有所不同。因此。