摘要：目的本研究旨在建立一种快速准确定量检测人G1型轮状病毒的TaqMan探针荧光实时PCR检测方法。方法以轮状病毒VP6基因为靶基因,分别设计2对引物及其相应的TaqMan探针,扩增目的片段,将目的片段克隆于PCDNA3.1+载体上,体外转录获得RNA,系列稀释后为标准品,建立TaqMan探针荧光定量实时PCR检测方法并对该方法进行验证。结果设计实验找到最优条件下的引物浓度(250nmol/L)、探针浓度(300nmol/L);通过对引起腹泻的人柯萨奇病毒、呼肠孤病毒等进行检测,结果均为阴性,表明该方法具有很好的特异性。该方法的最低检测量为5copies/μL。对该方法进行重复性实验,发现变异率均小于1%,重复性好。用已建立的方法对4份粪便临床样品进行3次重复试验,病毒RNA的检出率为100%。结论本实验初步建立了人G1型轮状病毒TaqMan探针荧光实时PCR检测方法,为G1型轮状病毒的诊断、检测和分子流行病学研究提供了一种新的方法。

摘要：目的构建PGC-LV-syncytin慢病毒载体并建立Syncytin基因表达下调的Jurkat细胞系.方法利用RNA干扰序列软件设计并筛选有效干扰序列,将构建好的Syncytin表达质粒与慢病毒包装质粒共转染至包装细胞293T,包装产生病毒颗粒后感染Jurkat细胞,获得Syncytin稳定沉默的细胞系.荧光显微镜下观察感染效率,分别使用RealtimePCR和Annexin V-APC单染法结合流式细胞仪检测目的基因表达水平和细胞凋亡率.结果成功构建了具有Syncytin干扰效果的慢病毒载体及其稳定沉默的Jurkat细胞系.结论该细胞系的构建为进一步研究Syncytin基因在白血病的功能提供了细胞模型.