摘要：为了构建肿瘤靶向性的人突变型IL18新基因并进行真核表达,以重组PCR技术构建EGFIL18融合基因,利用BactoBac杆状病毒表达系统和Sf9昆虫细胞株(来自秋天草地夜蛾)表达融合基因,纯化表达产物,并以IFNγ诱导实验和EGFR竞争结合实验初步评价融合蛋白的生物活性。测序证明构建的融合基因为原设计EGFIL18融合基因。SDSPAGE和Westernblot证明EGFIL18融合基因在昆虫细胞中获得表达,表达的融合蛋白的Mr约为20000,与理论值相符,纯化后融合蛋白具有特异的IL18单抗结合活性。IFNγ诱导实验和EGFR竞争结合实验显示,该融合蛋白具有肿瘤导向性和抗肿瘤活性。表明对突变型IL18成功地进行了肿瘤导向性改造并使其在真核细胞获得表达。

摘要：目的对中国流行的主要HIV-1毒株进行遗传特征分析，确定适用于中国HIV分子流行病学调查的gag基因扩增引物。方法从HIV序列数据库下载CRF07_BC、CRF08_BC、C亚型及M组参考毒株的gag全长序列，经序列比对后设计gag基因扩增引物；获得的基因片段采用邻接法构建系统进化树，评价不同片段用于分析和确定HIV-1亚型的可靠性，并检测部分样本以评定效果。结果目前我国常用的gag基因306／c-gag引物扩增片段（HXB2836～1507）构建的系统进化树中，CRF07_BC、C亚型进化簇的Bootstrap值分别为70％和59％，其可靠性较低，难以形成较为稳定的进化簇用于病毒亚型判断。而利用设计的gag基因GUX／GDX引物扩增片段（HXB2781～1861）构建的系统进化树中，CRF07_BC、CRF08_BC和C亚型序列能够独立成簇，其Bootstrap值分别为99％、99％和77％，具有较高的可靠性。在实际应用中，新设计的引物具有较高的扩增阳性率和测序成功率，获得序列形成B、C亚型和CRF01_AE、CRF07_BC、CRF08_BC等5个大的进化簇，其Bootstrap值均超过80％。即使仅用下游引物GDX测序获得的较短片段亦能获得较为可靠的系统进化树。结论GUX／GDX引物扩增获得的gag基因片段可以构建较为可靠的系统进化树，用于区分和判断我国流行的主要HIV-1毒株亚型，尤其是BC重组毒株和C亚型毒株。该方法在我国HIV分子流行病学调查和研究中有广泛的应用价值。