摘要：我们采用急性早幼粒细胞白血病(APL)NB4细胞株作为体外细胞模型,检测丹参酮ⅡA(TanⅡA)作用NB4细胞后早幼粒细胞白血病-维甲酸受体α(PML-RARα)mRNA和融合蛋白的变化,探索TanⅡA诱导NB4细胞分化与凋亡[1]的分子机制。

摘要：目的研究诊断超声介导自制微泡造影剂对体外血栓的溶解效应及探讨影响溶栓效果的主要因素,确定最优溶栓参数组合。方法制备标准化红色血栓,设计、建立体外溶栓模型。选用L16(45)正交表设计不同输出能量(因素A:5%、25%、50%、100%)、不同微泡量(因素B:50、100、200、400μL)、不同尿激酶浓度(因素C:100、200、400、800U/mL)、不同溶栓时间(因素D:10、20、30、40min)的4因素4水平实验组合,在固定诊断超声频率为1.82MHz条件下,按照组合对制备好的4种栓龄(3、6、12、24h)标准红色血栓进行体外溶栓实验。采用组织病理切片HE染色及扫描电镜观察溶栓前后血栓结构。采用溶栓前后质量减少计算溶栓率,统计学方法分析结果。结果光镜及扫描电镜下见各栓龄血栓溶栓后,血栓纤维网架被破坏。超声输出能量、微泡量、尿激酶浓度、溶栓时间4个因素对各栓龄血栓溶栓效果的影响均有统计学意义(P均<0.05);尿激酶对溶栓率的影响最大,最优溶栓参数组合为C4-D4-A1-B4,即:尿激酶800U/mL、溶栓时间40min、输出能量5%、微泡量400μL;4种因素各水平对4种栓龄血栓实验结果影响的效应曲线由高到低依次为3h、6h、12h、24h;不同栓龄血栓溶栓结果之间差异有统计学意义(P均<0.05)。结论诊断超声介导微泡造影剂具有助溶作用;在超声频率为1.82 MHz、能量输出为5%时,微泡已能被破坏而增强超声空化效应;固定超声频率,在高尿激酶浓度、延长溶栓时间、增大微泡量参数条件下可获得最优溶栓效果;随着血栓栓龄的增大,溶栓效果减低。

摘要：目的构建bcr/abl的特异性siRNA真核细胞表达载体,并初步探索对K562细胞bcr/ablmRNA和P210蛋白的影响。方法根据GenBank数据库提供的bcr/abl基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计双链小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA),再转化为能表达其小发卡结构RNA(smallhairpinRNAs,shRNA)的DNA序列,并与pTER质粒定向连接,构建受控于人RNA聚合酶启动子H1的真核表达载体pTER117、pTER363,经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定;在脂质体的介导下转染K562细胞,用RT-PCR分析bcr/ablmRNA的表达,细胞化学染色检测P210蛋白的表达。结果构建bcr/abl融合基因siRNA真核表达载体pTER117、pTER363,经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致,转染K562细胞24h后,pTER117、pTER363分别使bcr/ablmRNA的相对水平下降52%、43%,使P210蛋白分别下降47%、40%。结论bcr/abl融合基因siRNA真核细胞表达载体构建成功,并有效干扰K562细胞bcr/abl的表达。

摘要：目的:构建特异性的抗慢性髓细胞白血病融合基因bcr/ablmRNA的siRNA真核细胞表达载体,探索RNA干扰(RNAi)分子靶向治疗慢性髓细胞性白血病(CML)的作用。方法:根据GenBank数据库提供的bcr/abl基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计双链小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA),再转化为能表达其小发卡结构RNA(SmallhairpinRNAs,shRNA)的DNA序列,并与pTER质粒定向连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子H1的真核表达载体pTER/shRNA1、pTER/shRNA2,经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定。结果:构建慢性粒细胞白细胞bcr/abl融合基因siRNA真核表达载体pTER/shRNA1、pTER/shRNA2,经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致。结论:抗慢性粒细胞白细胞bcr/abl融合基因siRNA真核细胞表达载体的构建成功。