摘要：设计合成了一种发夹型核酸适体（Aptamer），结合聚合酶反应建立了蛋白质荧光分析新方法．该核酸适体同时作为蛋白质配体和聚合反应模板，与靶蛋白特异结合后，其构象发生了变化，启动聚合反应，从而在未直接标记核酸适体的情况下，通过监测聚合反应进程来检测蛋白质的浓度．采用该方法检测凝血酶的线性范围为0．5～8nmoL／L，检测下限为0．5nmoL／L，为蛋白质检测提供了一种简便快速的非直接标记的荧光分析方法，有望在蛋白质组学的研究中得到广泛的应用．

摘要：根据p53基因的序列设计并合成了能特异性检测p53mRNA的分子信标(MB),发展了一种快速定量测定细胞内总RNA提取物中p53mRNA的方法.采用鼻咽癌(CNE2)细胞系和经RNA干扰技术降低p53基因表达的CNE2-p53RNAi细胞系,抽提总RNA并用MB检测,验证了MB的检测对象是p53mRNA.将该方法应用于多种肿瘤细胞内p53基因表达水平的分析,表达变化趋势与经典的mRNA分析方法RT-PCR检测结果相符.在此基础上,用MB对5-氟尿嘧啶(5-Fu)处理的肺腺癌细胞(A549)进行了p53mRNA的体外定量检测,结果表明采用MB能够快速地获知该药物对细胞内p53mRNA表达影响的信息.

摘要：报道了一种基于发夹型荧光探针的甲基化酶活性的分析方法,甲基化酶和相应的限制性内切酶的识别位点被设计在发夹型探针的茎部,四甲基罗丹明(TAMRA)被连接在探针的5'端,其荧光被连在3'端的熄灭基团4-(4'-二甲基对胺基偶氮苯)苯甲酸(DABCYL)所熄灭.限制性内切酶可切割未发生甲基化修饰的探针,导致探针的发夹结构遭到破坏,引起TAMRA荧光信号的恢复.根据荧光信号的恢复程度可实现对甲基化酶活性的分析.在此基础上,建立了一种简便、快速分析抗肿瘤药物对DNA甲基化酶活性的影响的方法,为筛选针对基因甲基化异常引起的恶性肿瘤的治疗药物提供了一种新的思路和方法.

摘要：以核酸适体作为识别分子,建立了一种简单、灵敏特异的蛋白质检测新方法.该方法以凝血酶为目标蛋白,针对其两个结合位点,分别设计了两条具有3′末端互补碱基序列的核酸适体探针.当两条探针同时与凝血酶结合时,末端借助接近效应形成稳定的杂交并在聚合酶的作用下发生聚合反应,双链DNA产物的量通过Sybr GreenⅠ的荧光信号指示出来.实验结果表明,聚合反应初速度与凝血酶的浓度正相关.本方法中核酸适体探针设计简单灵活,对目标蛋白选择性和灵敏度高,检测下限可达到6.9pmol/L.

摘要：发展了一种基于连接酶介导的诱导荧光共振能量转移技术用于基因点突变的准确快速检测方法.针对特定突变位点设计的核酸探针,当与模板之间完全匹配时,被连接形成一条长的双链,双链特异性嵌入荧光染料SYBR Green I插入新生的双链区域,诱导荧光共振能量转移发生.相反,核酸探针与模板之间不匹配,则不能诱导荧光共振能量转移的出现.利用该方法,成功实现了β地中海贫血遗传病两种普遍存在的点突变Ivs-2-654(C→T)和CD17(A→T)的基因型检测.

摘要：DNA逻辑门在分子计算机和分子水平上的计算技术中具有重要作用。我们通过设计核酸适体与凝血酶特异结合导致胶体金团聚的方法,构建了凝血酶的DNA逻辑门。凝血酶作为输入信号与其核酸适体结合,将监测探针上的胶体金结合位点释放,两个核酸功能化修饰的胶体金同时结合到监测探针上,引起胶体金团聚,实现信号输出。根据这个设计原理,成功构建了蛋白质凝血酶的YES逻辑门。

摘要：以分子信标为报告分子,核酸适体为识别分子,发展了一种新的凝血酶检测方法.含有分子信标互补序列的核酸适体探针与凝血酶结合后,分子信标的荧光信号下降,从而得到凝血酶的浓度信息.该方法快速、灵敏,核酸适体探针无需荧光标记、设计简单,检测限达到0.83nmol/L.