摘要：目的:利用反义策略,设计、筛选针对agrA mRNA的反义锁核酸,阻断agr群体感应系统,降低MRSA毒力因子的表达,减小细菌生存压力,为抗耐药菌感染提供一种新策略。方法:应用Primer Premier 5.0和RNA structure 4.5两种软件,设计、筛选2条针对agrA mRNA的反义寡核苷酸序列,对其进行锁核酸修饰,并与透膜肽(KFF)3K共价连接,将这两条反义序列导入细菌体内。体外与MRSA共培养,观察细菌生存情况。实时定量PCR检测其对agrA及agr群体感受系统的效应分子RNAⅢ和下游毒力基因hla的转录水平的影响,Western blot检测其是否能抑制α-溶血素的表达。结果:两条反义锁核酸序列PLNA34和PLNA522在体外均无抗菌活性,但都能不同程度的抑制agrA,RNAⅢ和hla的转录水平;相比较而言,PLNA34的抑制效果更佳,并能明显抑制α-溶血素的分泌表达。结论:agrA可作为抗MRSA感染的新靶点,为新型抗MRSA药物的研发提供了理论基础。

摘要：目的探讨脱氧核酶抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(M RSA)耐药基因m ecR1的表达对M RSA耐药性的影响。方法设计、合成特异性针对耐药基因m ecR1m RNA的硫代脱氧核酶,将其导入细菌,通过半定量RTP-CR观察脱氧核酶对耐药基因m ecR1及其下游基因m ecA表达的抑制作用,并通过平板克隆形成实验观察脱氧核酶对M RSA耐药性的影响。结果加入脱氧核酶后培养的M RSA,m ecR1与m ecA的m RNA表达水平较对照组显著降低(P<0.01),在含苯唑西林(6m g L/)的M H-琼脂培养基表面生长的菌落单元数也低于对照组(P<0.01)。结论特异性抗m ecR1脱氧核酶阻断耐药基因m ecR1m-ecA的表达,可以部分恢复M RSA对抗生素的敏感性。

摘要：目的探讨脂质体包裹的靶向耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药基因mecA的硫代寡聚脱氧核苷酸(PSODN010)能否有效逆转MRSA对β-内酰胺类抗生素的耐药性。方法以mecA mRNA为靶点设计合成PS-ODN010;薄膜分散法制备新型的包裹PS-ODN/PEI纳米微粒脂质体并进行质量评估;体外实验测定细菌生长曲线、菌落数(CFU)等;实时定量PCR法检测PS-ODN010对mecA表达的影响。结果实验结果显示脂质体的包封率为75.9%±3.91%;脂质体包裹的PS-ODN010能浓度依赖性的抑制mecA表达;给予脂质体包裹的PS-ODN010后,苯唑西林明显抑制MRSA的生长(P<0.01),MRSA的菌落数明显低于对照组(P<0.01),苯唑西林等5种β-内酰胺类抗生素对MRSA的MIC显著降低。结论脂质体包裹的抗mecA的PS-ODN010能够选择性抑制MRSA的mecA表达,有效逆转MRSA对β-内酰胺类抗生素的耐药性。

摘要：目的:用人工合成磷脂二棕榈酰磷脂酰胆碱(dipalmitoyl phosphatidylcholine,DPPC),二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(dimyristoyl phosphatidylglycerol,DMPG)制备反义寡核苷酸阴离子脂质体并研究脂质体包裹的抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistantstaphylococcus aureus,MRSA)耐药基因表达信号传导通路中BlaR1 mRNA表达的反义寡核苷酸(antisensephosphothioate oligodeoxynucleotides,AS-ODNs)对MR-SA耐药性的影响。方法:设计合成AS-ODNs;薄膜分散冻干法制备其脂质体;透射电镜观察脂质体的形态;离心纯化脂质体并用紫外分光光度计测定包封率、渗漏率;振荡法检测体外释放度;平板克隆形成实验计数菌落数CFU;微量法测定细菌生长曲线。结果:反义寡核苷酸阴离子脂质体大小均匀,为圆球体,包封率为77.38%,冷冻条件下保存1月后渗漏率为0.18%,体外释放度实验表明24 h后约60%的药物从脂质体中释放,反义寡核苷酸脂质体可显著抑制MRSA生长,脂质体包裹的不同剂量的AS-ODNs中MRSA的菌落形成单位(CFU)与空白对照组比较明显减少,具有剂量依赖性,且效果明显优于未被脂质体包裹的AS-ODNs。结论:采用薄膜分散冻干法制备反义寡核苷酸阴离子脂质体,包封率较高,质量稳定,反义寡核苷酸脂质体能逆转MRSA的耐药性,效果明显优于单用AS-ODNs,可作为反义寡核苷酸进入细菌的载体。

摘要：目的 :探讨抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药基因blaR1表达的脱氧核酶对MRSA耐药性的影响。方法 :以耐药基因blaR1的mRNA为靶点 ,设计合成脱氧核酶DrzB ,导入细菌后通过平板克隆形成实验观察DrzB对MRSA细菌耐药性的影响 ,通过RT PCR观察DrzB对耐药基因blaR1表达的抑制作用。结果 :加入DrzB后培养的MRSA ,在含苯唑西林 (6mg·L-1)的M H琼脂培养基表面生长的菌落单元计数低于对照组 (P <0 .0 1) ,blaR1的mRNA表达水平也较对照组降低 (P <0 .0 1)。结论 :导入以blaR1的mRNA为靶基因的DrzB阻断耐药基因表达 ,可以部分恢复MRSA的抗生素敏感性。脱氧核酶DrzB是一种特异性的。

摘要：心血管系统药理学的教学内容是药理学教学中的重点和难点,以器官系统为中心的整合教学可有效地结合临床问题与理论知识,更加重视对学生实践和创新能力的培养。本文介绍了基于器官系统的心血管药理学在整合教学模式中的课程设计、理论授课、问题为基础的教学以及实验操作等多层次教学的实践,并取得了良好的教学效果和实践经验。