摘要：目的探讨siRNA沉默KLK6基因表达对乳腺癌细胞生长的抑制作用及其机制,为乳腺癌的基因诊断和治疗提供理论依据。方法针对KLK6 mRNA序列设计合成siRNA,构建2个重组质粒PGCsilencerTMH1/GFP/Neo/KLK6和PGCsilen-cerTMH1/GFP/Neo/Non;将重组质粒导入乳腺癌MCF-7细胞株,G418筛选获得稳定转染的细胞株;实验分为脂质体对照、阴性质粒转染对照及KLK6 siRNA重组质粒转染组,实时荧光定量PCR法检测KLK6 mRNA的表达的变化,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测量细胞生长情况。结果测序证实表达载体构建成功,在稳定转染重组质粒PGCsilencerTMH1/GFP/Neo/KLK6的乳腺癌MCF-7细胞株中,KLK6 mRNA抑制率(76%)明显高于阴性质粒对照组(2.7%),MCF-7细胞增殖活性显著低于阴性对照组和脂质体对照组。结论重组质粒PGCsilencerTMH1/GFP/Neo/KLK6可抑制乳腺癌细胞中KLK6基因的表达,并抑制乳腺癌细胞的生长。

摘要：目的探讨siRNA沉默KLK6基因表达对卵巢癌细胞生长的抑制作用及其机制,为卵巢癌的基因诊断和治疗提供理论依据。方法针对KLK6 mRNA序列设计合成siRNA,构建2个重组质粒PGCsilencerTMH1/GFP/Neo/KLK6和PGCsilencerTMH1/GFP/Neo/Non;将重组质粒导入卵巢癌SKOV-3细胞株,G418筛选获得稳定转染的细胞株;实验分为脂质体对照、阴性质粒转染对照及KLK6 siRNA重组质粒转染组,实时荧光定量PCR法检测KLK6 mRNA的表达的变化,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测量细胞生长情况。结果测序证实表达载体构建成功,在稳定转染重组质粒PGCsilencerTMH1/GFP/Neo/KLK6的卵巢癌SKOV-3细胞株中,KLK6 mRNA抑制率(76%)明显高于阴性质粒对照组(2.7%),SKOV-3细胞增殖活性显著低于阴性对照组和脂质体对照组。结论重组质粒PGCsilencerTMH1/GFP/Neo/KLK6可抑制卵巢癌细胞中KLK6基因的表达,并抑制卵巢癌细胞的生长。

摘要：目的构建带有黄色荧光蛋白突变体Venus标签的人缓激肽2型受体(bradykinin receptor 2,B2R)真核表达载体,用于B2R与相关受体及蛋白的相互作用、B2R受体介导的信号转导机制的研究等。方法根据人B2R基因序列设计引物,以质粒pcDNA3.1-B2R为模板,PCR扩增目的基因人B2R。EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切扩增产物及质粒pVenus-N1,经回收、连接、转化,获取重组质粒。对重组质粒进行酶切、测序鉴定。转染重组质粒至HEK293T细胞,荧光显微镜观察受体B2R的细胞定位,蛋白印迹法检测目的蛋白人B2R蛋白的表达。结果 PCR扩增出了1条长度为1176bp的基因片段,测序结果与GenBank(AY275465)相同。荧光显示B2R表达于质膜。Western blot结果显示,实验组蛋白印迹条带与目的蛋白大小相同,为44kDa。结论成功构建了pB2R-Venus重组真核表达载体,瞬时转染成功,获得了转染有重组质粒的HEK293T细胞。成功构建的重组质粒pB2R-Venus可用于后续BRET、FRET等实验研究,有助于B2R介导的信号转导机制的探讨和药物靶点的寻找。

摘要：本文对哺乳动物中RNA干扰(RNAi)现象,短干扰RNA(siRNA)设计原则、经验及其体内、体外合成方法,siRNA导入真核生物体内的4条途径、剂量及干扰效果以及siRNA在体内研究的优势及其局限性等作一综述。

摘要：目的探讨基于脑科学的课堂教学策略对医学细胞生物学课程教学效果的影响。方法选取我校2021级临床医学本科学生,随机抽取两个合堂班(随机抽取8个班,每4个班编为一个合堂班,每个合堂班160人)分成对照班和试验班,在医学细胞生物学课堂教学中分别运用传统教学法和基于脑科学的教学策略进行课堂讲授。通过课堂测试、实验测试、期末测试等检测学生的学习效果。以发放调查问卷的形式,研究学生在教材内容掌握、教学互动和解决问题的能力等方面的满意度。结果试验班平时成绩实验成绩和期末成绩明显好于对照班(t=5.77,P<0.001;t=2.72,P=0.008;t=8.38,P<0.001)。基于脑科学的课堂教学设计在“善于运用思维导图、框架图等进行知识讲授”、“对学生的回答给予正面的、及时的评价”等11个方面均明显优于对照班(P<0.05)。结论基于脑科学的课堂教学策略教学效果良好,学生满意度高,可进行推广。

摘要：目的 PIWIL1基因沉默对人乳腺癌MCF-7细胞增殖活性的影响,为乳腺癌的基因诊断和治疗提供理论依据。方法针对PIWIL1 mRNA序列设计合成siRNA并筛选最佳siRNA,构建pGCsilencer^(TM)H1/GFP/Neo/PIWIL1 RNAi和pGCsilencer^(TM)H1/GFP/Neo/Non RNAi重组质粒;将重组质粒导入乳腺癌MCF-7细胞株,G418筛选获得稳定转染的细胞株;实验分为脂质体对照组、阴性质粒转染对照组(阴性对照组)及PIWIL1-shRNA重组质粒转染组(PIWIL1-shRNA组),实时荧光定量PCR法检测PIWIL1 mRNA表达水平的变化,Western blot检测细胞中PIWIL1蛋白表达,CCK-8检测干扰质粒对MCF-7细胞增殖活性的影响。结果荧光显微镜检测显示稳定表达重组质粒pGCsilencer^(TM)H1/GFP/Neo/PIWIL1 RNAi的乳腺癌MCF-7细胞株筛选成功,其PIWIL1 mRNA抑制率(74%)明显高于阴性对照组(5.4%),PIWIL1-shRNA组细胞PIWIL1蛋白表达水平显著低于脂质体对照组和阴性对照组细胞,MCF-7细胞增殖活性显著低于阴性对照组和脂质体对照组差异具有统计学意义(P <0.05)。结论重组质粒pGCsilencer^(TM)H1/GFP/Neo/PIWIL1 RNAi可抑制乳腺癌细胞中PIWIL1基因的表达,进而降低细胞活性。