摘要：早在2002年，WHO推荐临床检测使用血浆，而不是传统上的血清。目前仪器自动化吸样检测几乎涉及所有项目，血清检测常因纤维蛋白堵塞仪器导致的检测不准确或仪器故障而成为检验操作的常见问题；而血清凝固需要的时间成为影响着检测结果正确性和报告单延迟发送的关键因素。更重要的是，凝血激活对RBC、WBC、PLT的损伤而导致的细胞内物质的释放，从而影响检测结果。

摘要：目的:构建大鼠野生型肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)基因及其特异性短发卡状小干涉RNA(shRNA)真核表达质粒,并观察其在大鼠肾小球系膜细胞(GMC)中过表达和沉默TRAF6基因的情况。方法:用DNA重组技术将针对大鼠TRAF6基因的CDS区序列(加HA标签)和针对其不同位点所设计的3种shRNA序列分别克隆到pcDNA3.1及pGenesil-1/GFP真核表达质粒中。在酶切鉴定及序列测定正确后,用NeonTM电转仪,将上述质粒分别转染入培养的大鼠GMC中,然后用Western blot检查HA-TRAF6融合蛋白的表达情况,同时筛选最有效的TRAF6shRNA。结果:限制性酶切及核酸序列分析确证,上述TRAF6基因过表达和shRNA表达质粒均构建成功。Western blot显示,构建的pcDNA3.1-HA-TRAF6质粒能在大鼠GMC中表达,且TRAF6 shRNA-1具有最佳的沉默效率。结论:本实验成功构建了大鼠野生型TRAF6真核表达质粒及其特异性的shRNA表达载体,这为今后进一步研究TRAF6基因的生物学功能提供了实验基础。

摘要：目的 探讨初诊未治或复发多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）患者血小板在受到二磷酸腺苷（adenosine diphosphate,ADP）刺激后P-选择素（P-selectin）的表达,并探讨血小板活化差异是血小板原因还是血浆对血小板产生了干扰.方法 选择2009年1月～8月确诊为MM患者30例,正常对照30例.设计四组实验进行比较：A组为MM患者富血小板血浆;B组为相应MM富血小板血浆＋对照乏血小板血浆（V：V=1：4）;C组为正常富血小板血浆;D组为正常富血小板血浆＋MM乏血小板血浆（V：V=1：4）,对ADP刺激前后血小板活化标志物P-selectin的表达进行流式分析,计算各组P-selectin相对升高值,相对升高值=（刺激后P-selectin-刺激前P-selectin）/刺激前P-selectin.结果 A组与C组比较差异有统计学意义（t=2.67,P＜0.05）;A组与B组、A组与D组比较,差异无统计学意义（t=1.34,1.41;P＞0.05）;C组与D组比较t=2.98,P＜0.01,C组与B组比较t=2.61,P＜0.05,差异均有统计学意义.结论 MM与正常血小板在ADP的刺激下发生活化的程度是不一致的,MM的血小板活化功能受到影响;用正常人血浆对MM血小板进行稀释,对血小板的活化功能并没有什么实质性改变,在MM的血小板表面可能存在不能够轻易去除的包裹蛋白,而MM的血浆对正常血小板是有干扰的,可能通过附着在正常血小板表面而影响其功能.