摘要：目的以近交系C57小鼠与远交系KM小鼠为研究对象,应用霍恩氏(Horn)法与上-下法(up-down procedure,UDP)的改良方案,比较硝酸镧(Ⅲ)六水合物的急性经口毒性。方法参照国内外急性经口毒性试验标准或指南中Horn法与UDP法的设计与计算原理,分别选用90只C57小鼠与KM小鼠(雌雄各半)进行随机分组后,经口灌胃给予预定剂量的硝酸镧(Ⅲ)六水合物水溶液,观察实验动物的中毒表现和死亡情况,计算并比较染毒后1、4、24和48 h以及7和14 d时的半数致死量(LD_(50))。结果两种方法观察期结束后,硝酸镧(Ⅲ)六水合物对C57小鼠与KM小鼠的急性经口毒性LD_(50)均在低毒级别(501~5000 mg/kg·bw),但UDP法的95%可信限范围较广,LD_(50)计算的准确性没有Horn法高。另外,C57小鼠的中毒表现多在4 h内,较KM小鼠(24 h)明显更早,并且动物死亡数量也明显更多,提示C57小鼠的毒性反应更加敏感。并且,同一检测方法下某一小鼠的雄性LD_(50)在各时间点均普遍较低于雌性,存在一定的性别差异。结论两种方法检测所得硝酸镧(Ⅲ)六水合物对C57小鼠与KM小鼠的急性经口毒性等级均为低毒,且存在明显的性别差异(毒性反应雄性>雌性),但C57小鼠相对更敏感,提示在进行其他稀土化合物急性毒性检测与评价以及应急毒性检测需缩短观察时间时或可作为优选品系使用。

摘要：目的进一步证实在猪主动脉平滑肌细胞中磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)抑制胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)刺激引起的细胞增生,以及探讨其可能的机制。方法使用AMPK活化剂二甲双胍增强细胞内AMPK的活化(表现为AMPK第172位苏氨酸磷酸化增高);采用定点突变获得组成性激活型AMPK突变体,设计短发卡RNA (short hairpin,shRNA)序列构建AMPK干扰载体,并分别包装产生组成性激活型AMPK和AMPK敲低慢病毒。分别采用AMPK活化剂二甲双胍处理、组成性激活型AMPK慢病毒感染和AMPK敲低慢病毒感染猪主动脉平滑肌细胞,观察AMPK活性对猪主动脉平滑肌细胞中IGF-1刺激引起的细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinases 1/2,ERK1/2)活性(表现为202位苏氨酸和204位酪氨酸的磷酸化)及其下游细胞增生的影响。结果二甲双胍明显增强AMPK的活性(表现为172位苏氨酸磷酸化增高),并明显抑制IGF-1刺激引起的ERK1/2活化(表现为202位苏氨酸和204位酪氨酸的磷酸化受到抑制);组成性激活型AMPK表达能明显抑制IGF-1刺激引起的ERK1/2活化以及下游的细胞增生;在AMPK敲低细胞中,IGF-1能引起更强的ERK1/2活化。结论 AMPK能通过抑制ERK1/2活化抑制血管平滑肌细胞IGF-1信号,并能抑制IGF-1刺激引起的血管平滑肌细胞增生。