摘要：目的研究红色荧光蛋白编码基因Dsred在酿酒酵母菌中的快速克隆与表达。方法根据已发表基因序列设计引物,采用连续重叠PCR方法快速克隆获得全长Dsred基因,将其与pMD-18T载体连接后进行测序鉴定。通过In-fusion方法将鉴定正确的pMD-Dsred重组载体与酿酒酵母表达载体pYeDP60进行连接,测序后利用LiAc方法将鉴定正确的pYeDP60-Dsred重组表达载体转化至酿酒酵母菌W303-1B中,PCR扩增筛选阳性克隆,获得的W303B[pYeDP60-Dsred]工程菌经诱导培养后进行SDS-PAGE电泳分析和绿光激发荧光成像检测。将工程菌分别接种至YPD、YPG、SCG和SCD培养基,培养48、72、96、120和144h后分别测定吸光度(A600)值。取诱导表达后的工程菌(菌液组)进行离心(菌体组)、离心后加甘油(高渗组)处理,分别置于–70、–20、4、28和37℃条件培养,荧光显微镜观察其表达特性。结果连续重叠PCR扩增和测序鉴定结果表明,扩增获得的Dsred基因长为678bp,其序列与已发表的基因序列完全一致;Dsred基因已成功插入pYeDP60-Dsred重组表达载体,且受酵母诱导型启动子GAL10-CYC1调控表达。PCR扩增筛选和SDS-PAGE分析显示,pYeDP60-Dsred重组表达载体已成功导入酿酒酵母菌中,诱导表达产物相对分子质量与预期相符,且诱导后工程菌可在绿光激发下发出红色荧光。4种培养基内工程菌的菌体生长情况无明显差别,重组Dsred红色荧光蛋白表达不会抑制酿酒酵母菌体生长。荧光显微镜观察显示,工程菌经不同处理后,高渗组红色荧光蛋白成熟时间最短,菌液组时间最长;红色荧光蛋白在37℃条件下培养时成熟最早,但降解速度较快。结论成功构建了pYeDP60-Dsred重组酿酒酵母表达载体,实现了Dsred基因在酿酒酵母菌体内的异源表达。红色荧光蛋白表达对酿酒酵母菌体生长无明显影响,且离心保留菌体和加入甘油等缺水高渗处理都有利于红色荧光蛋白的成熟。

摘要：生长基元在晶体生长过程中是一个十分重要的问题，由于这个问题涉及到母液相结构而变得比较复杂。至今人们对母液相的结构仍缺乏认识并且也缺少有力的实验手段。因此，大大地影响了对晶体生长过程的透彻了解。为了了解晶体生长过程中液固相转变时结构变化的行为，我们根据硼酸盐中Ｂ－Ｏ键的振动在红外有明显的吸收峰这一特征，采用红外光谱和红外激光拉曼光谱来进行研究。本文主要报导我们自行设计和建立的一套高温晶体生长实时分子振动光谱测量方法与装置，以及应用这套装置对ＢＢＯ和ＬＢＯ晶体生长过程进行的初步研究。这套实时测量系统是建立在已有的进口激光拉曼光谱仪和付里叶变换红外光谱显微镜联用光谱仪的基础上，设计与安装了一套透射式实时光谱探测系统，主要包括探测头和微机控制的高温炉。具体过程是用一套光纤耦合器将泵浦光从光谱仪中耦合进光纤，然后经一光纤耦合聚焦系统将泵浦光经高温炉的窗口聚焦在样品上，样品辐射出的信号光从窗口经反射镜进入由球面反射镜构成的高精度成像系统，将样品的像成像于光栏上。这样只有与光栏小孔共焦的样品区域内所发出的红外辐射才能通过，再经光纤耦合器、光纤、光纤耦合器送入光谱仪进行光谱测量。我们设计的样品架是由一个铂丝环做成的。首先将?

摘要：今天，地暖已发展成为相对成熟的采暖技术。本文将回顾地暖的历史。感慨地暖的现在，畅想地暖的未来，进行一次跨越时空的旅行!

摘要：目的分析下调Toll样受体4(TLR4)mRNA对手足口病(HFMD)模型乳鼠树突状细胞的影响及作用机制,为手足口病防治提供依据。方法选取45只SPF级12日龄BALB/c乳鼠,分离并培养树突状细胞,设计合成TLR4 siRNA序列并做细胞感染。建立手足口病模型,分为模型组、下调组、上调组各15只,下调组乳鼠腹腔注射下调TLR4基因的树突状细胞,上调组腹腔注射上调TLR4基因的树突状细胞,模型组腹腔注射等量灭菌用水。检测三组乳鼠树突状细胞增殖、凋亡,血清白介素-6(IL-6)、白介素-12(IL-12)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路蛋白表达量,并进行比较。结果下调组不同时间点树突状细胞增殖率低于上调组(t=20.160、19.050、55.380,P<0.001);下调组不同时间点树突状细胞凋亡率高于上调组(t=34.740、84.570、48.020,P<0.001)。下调组血清IL-6、IL-12、TNF-α水平低于上调组(t=39.330、12.660、33.690,P<0.001)。下调组树突状细胞p-p38MAPK、p-JNK、p-ERK1/2蛋白表达量低于上调组(t=33.690、17.470、27.800,P<0.001)。结论下调TLR4 mRNA经抑制MAPK通路活化,调控通路蛋白,下调IL-6、IL-12、TNF-α表达,促进手足口病乳鼠树突状细胞凋亡,可以为手足口病防治提供新思路。

摘要：电能是国家发展的重要能源基础,随着社会的进步和发展,电能应用领域越来越广,同时电能的消耗也越来越大。在"节能减排,低碳生活"的要求下,当前的民用建筑应该从节能的角度考虑合理设计照明节能系统,尽量减少电能的消耗。

摘要：水库海漫损坏的原因,主要有设计、施工和管理3个方面。在设计上,由于输水洞消力池长度不够,护坦和下游水渠衔接不良,冻融滑坡影响考虑不周;在施工上,由于反滤层的层次没有处理好,建筑材料选用不当,块石规格小,砂石料级配不合理;在管理上,由于没有专人管理,存在违章操作现象,导致海漫工程受到破坏严重。

摘要：地暖是一种舒适、节能的采暖方式,舒适对业主有益,节能对国家有利,所以地暖应得到广泛推广。当然,我们也应足够重视由于不合理应用地暖而导致的异样声音,应采取相应的技术措施,充分发挥地暖舒适节能的优势。

摘要：随着经济的发展,科学技术的提高和教育的现代化,越来越多的学校配备了多媒体教室,利用最新的多媒体技术进行课堂教学.作为一种新的教学手段,多媒体技术有着其他教学手段无可比拟的优越性.它集文字、声音、图像、图形、视频和动画等多种传媒于一体,并可以灵活地把它们组合到一起,多方位、多角度、多途径地向学生传递信息,以其良好的交互性为教师和学生提供生动活泼、灵活多样、丰富多彩的人机交流的教学环境,较好地完成教与学、学与练的全过程,具有极佳的教学效果.

摘要：日前，国际燃气具巨头——林内在中国的首家研修中心在北京落成并正式运营。业内人士认为，此举预示着体内在关注为广大用户提供高品质生活服务的同时，还将目光瞄向了专业人才培养以及本土化运作。未来，林内的用户将享受到林内专业工程师所带来的，与发达国家同步的设计、安装、保养、维护等更专业的服务。

摘要：企业形象是企业文化建设的灵魂.一个企业给予公众印象的好坏,企业的知名度和美誉度如何,决定了这个企业长期以来的经营行为和企业文化建设.因此,可以说企业形象是企业作为一个整体所体现出的一种综合素质.企业形象的塑造,不仅仅在于统一VI设计,还应当根据时代发展不断赋予新的内容.