摘要：根据猪圆环病毒3型和猪伪狂犬病病毒保守基因序列设计引物和探针,通过优化反应体系,建立了猪圆环病毒3型和猪伪狂犬病病毒双重荧光定量PCR检测方法,评估了该方法的特异性、敏感性及重复性。结果显示,该方法能特异性扩增猪圆环病毒3型和猪伪狂犬病病毒核酸,与猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、日本脑炎病毒、猪圆环病毒1型、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪博卡病毒无交叉反应。猪圆环病毒3型和猪伪狂犬病病毒的最低检测限均为10 copies/μL;批内和批间重复性试验的变异系数均小于3%。用建立的双重荧光定量PCR方法对87份猪组织样品进行检测,结果显示,猪伪狂犬病病毒和猪圆环病毒3型的阳性率分别为17.24%和24.14%。上述结果表明,本研究建立的双重荧光定量PCR方法具有特异、敏感、稳定和快速的优点,可用于猪圆环病毒3型和猪伪狂犬病病毒鉴别诊断和流行病学调查。

摘要：为建立同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)、3型(PCV3)和4型(PCV4)的方法,根据GenBank中的PCV2、PCV3和PCV4基因保守序列设计引物和探针,通过反应体系优化后,建立同时检测PCV2、PCV3和PCV4的三重荧光定量PCR方法,并对其特异性、敏感性、稳定性、与普通PCR方法的一致性进行评价。结果显示,建立的方法可特异性检测PCV2、PCV3和PCV4,与猪细小病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒1型、猪伪狂犬病病毒、口蹄疫病毒、猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒无交叉反应产生。批间与批内重复性试验变异系数系数均小于3%。对83份猪组织样品进行检测,其中PCV2、PCV3和PCV4阳性率分别为68.67%,28.92%,20.48%。结果表明建立的三重荧光定量PCR方法具有敏感度高、特异性强和稳定性好的优点,可用于PCV2,PCV3,PCV4型的流行病学调查和鉴别诊断。