摘要：背景:白细胞介素12作为最具潜力的抑瘤因子一直是研究的热点,但其在结直肠癌方面的研究相对较少。目的:构建稳定表达人白细胞介素12的大鼠骨髓间充质干细胞株(h IL-12-BMSCs),观察其对大鼠结肠癌模型的影响。方法:设计并合成引物,PCR扩增并回收纯化后的p40和p35基因片段,行Overlap-ping PCR连接获得h IL-12的单链双亚基表达融合基因,与慢病毒包装系统共转染293T细胞,构建慢病毒过表达重组体,再转染大鼠骨髓间充质干细胞,药物筛选培育出稳转株。32只裸鼠皮下注射CT26细胞悬液造模成功后,随机分为4组:瘤周分别注射0.2 m L h IL-12-BMSCs(h IL-12-BMSCs组)、0.2 m L PBS溶液(PBS组)、0.2 m L骨髓间充质干细胞(骨髓间充质干细胞组)、0.2 m L表达IL-12的慢病毒液(LV-IL-12组),统计并分析各组瘤体生长情况。结果与结论:(1)观察期内PBS组与骨髓间充质干细胞组肿瘤体积差异无显著性意义(P>0.05),表明骨髓间充质干细胞本身对CT26瘤体生长无明显促进或抑制作用;(2)注射7 d后h IL-12-BMSCs组与PBS组、PBS组与LV-IL-12组间肿瘤体积差异均有显著性意义(P<0.01),表明白细胞介素12对CT26瘤体生长有明显抑制作用;(3)注射10 d后h IL-12-BMSCs组与LV-IL-12组间肿瘤体积差异有显著性意义(P<0.05),表明h IL-12-BMSCs抑制CT26生长优于LV-IL-12;(4)结果表明,h IL-12-BMSCs对裸鼠CT26移植瘤体生长有明显的抑制作用。

摘要：目的根据基因库中的人肝素酶基因序列，构建针对肝素酶（HPSE）基因的小干扰RNA（siRNA）及其表达载体，转染MDA-MB-231细胞后观察其对HPSE基因的干扰作用。方法设计HPSE靶向的发夹状siRNA，退火后连接人pGPU6／GFP／Neo载体，转化后进行序列鉴定，脂质体转染***-231细胞株，并进行荧光摄像，噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞的生长抑制率。结果设计出3条针对HPSE的siRNA，将退火后的双链寡核苷酸片段连接到pGPU6／GFP／Neo载体，测序结果正确。转染MDA-MB-231细胞后，MTF法显示重组质粒转染组乳腺癌细胞的生长均受到了抑制，抑制率分别为58．25±3．42、43．70±2．44、39．40±2．38，比较空白对照组4．48±2．28明显升高（P〈0．05）。结论成功构建针对HPSE基因的siRNA载体，转染MDA—MB-231细胞后，细胞的增殖能力减弱。

摘要：目的:根据基因库中的人乙酰肝素酶(HPSE)基因序列,构建针对乙酰肝素酶基因的小干扰RNA(siRNA)及其表达载体,转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞后观察其对HPSE基因的干扰作用。方法:设计HPSE靶向的发夹状siRNA,合成两条互补的寡核苷酸链(共4对),退火后连接入pG-PU6/GFP/Neo载体,转化后进行序列鉴定,脂质体转染MDA-MB-231细胞株,免疫蛋白印迹(West-ernblot)检测细胞蛋白质的表达。结果:设计出4条针对HPSE的siRNA,将退火后的双链寡核苷酸片段克隆到pGPU6/GFP/Neo载体,经过阳性菌落酶切鉴定与测序,结果正确,并通过脂质体转染方法转染到MDA-MB-231细胞株,Westernblot检测细胞蛋白质的表达明显降低。结论:成功构建了针对HPSE基因的siRNA载体,转染MDA-MB-231细胞后,HPSE蛋白的表达降低,其中HPSE-A和HPSE-B可明显抑制HPSE的表达。