摘要：目的获得鹅源副粘病毒(GPMV)NA-1株M、F和HN基因真核表达蛋白。方法将NA-1株GPMV经SPF鸡胚增殖、纯化,提取病毒基因组RNA。参考GenBank登录的NA-1株GPMV基因组序列,设计3对特异性引物,利用RT-PCR法,分别扩增M、F和HN基因开放阅读框(ORF),将目的基因克隆至pMD18-T-Simple载体,并进行酶切和序列测定。将目的片段克隆至pCI-neo表达载体,酶切鉴定正确的重组质粒,分别命名为pCI-M、pCI-F和pCI-HN。将重组表达质粒分别转染Vero细胞,用间接免疫荧光试验鉴定目的蛋白的表达。结果RT-PCR法分别扩增出M、F和HN基因,大小与预期一致。克隆载体及表达载体酶切及测序鉴定正确;重组真核表达质粒转染Vero细胞后,荧光显微镜下可见特异性荧光。结论利用pCI-neo真核表达载体在Vero细胞中成功表达了NA-1株GPMV M、F和HN基因,为下一步研究该病毒的出芽机制以及各结构蛋白的功能奠定了基础。

摘要：根据已发表的鹅源副黏病毒(GPMV)NA-1株F基因序列设计2对引物,引物中含有突变位点,分3次扩增F基因片段,从而得到目的基因片段,再利用酶切位点将基因片段与转座载体pFastBac 1连接,获得重组质粒,命名为pFastBac 1-F′,从而使改造后的F′基因编码的氨基酸裂解位点为112Gly-Arg-Gln-Gly-Arg-Leu117。并将pFastBac 1-F′进行测序鉴定后转化到DH10Bac宿主菌,将目的基因定向插入到Bacmid质粒中,经筛选获得的重组Bacmid F′转染Sf 9昆虫细胞,并进行表达检测。结果,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测获得蛋白特异条带,相当分子量约63 kD。

摘要：将本实验室保存的NA-1株鹅源副黏病毒(GPMV)经SPF鸡胚增殖,收集尿囊液进行病毒纯化,提取病毒基因组RNA。参考GenBank已收录的ZJ1株GPMV基因组序列,设计了4对特异性引物,利用RT-PCR法分别特异性的扩增出病毒NP、P和L基因片段,并将目的基因片段消化、回收纯化,克隆pCI-neo表达载体,转化大肠杆菌DH5α,小提质粒选取阳性克隆酶切、PCR鉴定并进行序列测定,结果表明NP、P和L基因正确克隆到pCI-neo表达载体中,并分别命名为pCI-NP、pCI-P和pCI-L。将构建好的pCI-NP、pCI-P和pCI-L重组质粒单独转染Vero细胞,在荧光显微镜下观察到特异绿色荧光,表明NP、P和L蛋白得到成功表达。

摘要：将本实验室分离保存的NA-1株鹅副粘病毒（GPMV）经SPF鸡胚增殖，收集鸡胚尿囊液进行病毒纯化，提取病毒基因组RNA。参考GenBank已收录的GPMV ZJ1株基因组序列，设计了8对特异性引物，RT—PCR法分别特异性的扩增出病毒各基因片段，并将各目的基因片段回收纯化．克隆PGEMT载体．转化大肠杆菌DH5α，小提质粒选取阳性克隆酶切鉴定并进行序列测定．对测定结果进行拼接得到全长cDNA序列（GenBank登录号：DQ659677）。NA-1株核苷酸比新城疫病毒（NDV）核苷酸多6个碱基，位于1644～1645nt之间，符合NDV核苷酸“六碱基原则”。序列分析结果表明，GPMVNA-1株与各地代表株核苷酸同源性81．2％～91．3％。同时根据各毒株F基因开放阅读框前389个核苷酸序列绘制出系统发育进化树，结果表明GPMNNA-1株与SFO2和QY97病毒株同属于基因Ⅶ型，不同于基因Ⅸ型NDV的国家标准株F48E9和基因Ⅱ型的LaSota传统弱毒株。

摘要：根据鹅细小病毒(GPV)B株全基因序列,设计并合成了1对特异性引物,采用PCR技术对GPVGD-01株的VP3基因进行扩增,将目的基因克隆到pGEM○R-T后测序,分析了GPV GD-01株VP3基因的遗传变异情况,并进行原核表达。结果表明,GPV GD-01株VP3基因全长1605bp,编码534个氨基酸(DQ665790),与已发表的GPV、番鸭细小病毒(MDPV)的核苷酸、氨基酸同源性分别为96.15%、80.1%,97.78%、89.13%,说明GPV VP3基因具有较高的遗传稳定性。结合亲水性、表面极性、抗原位点分析比较GPV、MDPV VP3基因,为研究GPV和MDPV感染谱差异的分子机制提供了一定的理论基础。原核表达显示,VP3蛋白的最高表达量占整个菌体蛋白含量的29.9%,经表达条件优化可产生大量可溶性VP3表达蛋白。SDS-PAGE与Western-blot分析显示,表达的VP3蛋白的相对分子质量约60000,并能与鼠抗GPV阳性血清反应,证明具有一定的反应原性,为进一步研制基因工程疫苗及诊断制品奠定了基础。

摘要：我国高度重视教育问题,学业被家庭和社会投入了大量的关注,构成了青少年学生时代的主要旋律。学业成绩不仅可以影响青少年的社会性发展,也会被社会性发展所影响。本研究采用交叉滞后设计,通过同伴提名和标准化考试对1283名初中生(M_(age)=13.43岁,SD=0.65岁,47.7%为女生)进行了为期一年的追踪研究,考察学业成绩和社会性发展(受欢迎程度、攻击行为)之间的相互预测关系。结果表明:(1)T1~T2时间段,学业成绩显著正向预测受欢迎程度;(2)T1~T3时间段,男生学业成绩均显著负向预测随后的攻击行为,但这一关系对于女生而言仅在T1~T2时间段显著,并且在该时间段男生的预测作用强于女生;(3)T1~T2时间段,受欢迎程度显著正向预测学业成绩,但预测强度弱于同时期学业成绩对于受欢迎程度的预测。本研究结果表明,青少年学业成绩、攻击行为与受欢迎程度之间存在着复杂的相互作用,并且这一作用随着性别以及时间的变化有所不同。研究结果对于促进青少年个体发展具有重要的意义。