摘要：3C样蛋白酶(3CLpro)是冠状病毒的主蛋白酶,在病毒复制及致病过程中发挥重要作用。本研究旨在对猪流行性腹泻病毒3C样蛋白酶(PEDV 3CLpro)进行真核表达,并对其结构和功能进行生物信息学分析。根据GenBank上PEDV 3CLpro基因的序列设计并合成特异性引物,通过RT-PCR方法进行3CLpro基因的扩增,亚克隆至pEGFP-N1真核表达载体中,并转染至HEK 293T细胞,通过荧光观察和Western blot鉴定该蛋白的表达。并利用生物信息学软件对3CLpro进行序列分析、结构和功能预测。结果显示:PEDV 3CLpro能够在真核细胞中稳定高效表达,大小约为43 kDa,共编码302个氨基酸,分子式为C1446H2250N400O437S15,亲水性平均系数为0.058,不稳定指数为33.19,含有丰富的糖基化位点及磷酸化位点。其二级结构包含20.53%的α螺旋、38.41%的β折叠以及41.06%的无规则卷曲,对应的2个催化位点分别为41位的组氨酸(His)和144位的半胱氨酸(Cys)。上述结果为进一步研究PEDV 3CLpro在病毒与宿主互作中的生物学功能提供数据支撑。

摘要：针对铁路和地铁桥建合一高架车站站厅和站台层分割缝分块给结构整体分析带来的扭转变形计算问题,分别以不规则分缝大型铁路车站和规则对称分缝标准地铁车站为例,对比了整体计算和分块计算对结构平面扭转不规则的判断结果,分析了整体计算可能导致扭转不规则判断失误的原因,提出了分楼层和分块计算判断扭转不规则的建议。