摘要：一步法多重RT-PCR将反转录(Reverse transcription,RT)和聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)整合为一个步骤,能够在同一反应体系中同时扩增出多个目的片段。为使用一步法多重RT-PCR技术同时检测黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)和马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY),根据3种病毒基因组序列相对保守区域设计了3对特异性引物,并对RT-PCR的反应体系和反应条件进行了优化。优化结果显示,最终的多重RT-PCR反应特异性较高,且3个片段的扩增效率基本一致。田间样品的检测结果表明,一步法多重RT-PCR方法能够准确而快速地同时检测出3种病毒,优于酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)。

摘要：为快速准确地检测烟草黄瓜花叶病毒(CMV),根据黄瓜花叶病毒基因组序列相对保守区域设计了一对特异性引物,整合了反转录和PCR反应所需酶和缓冲液,通过反应条件的优化,建立了基于一步法RT-PCR检测烟叶感染CMV的方法,在此基础上组装了检测试剂盒。进一步分析了该试剂盒的特异性、稳定性和检测灵敏度。结果表明,该试剂盒具有很强的特异性、良好的重复性和较高的灵敏度(模板RNA浓度最低达到10 ng量级)。初步应用结果显示,在多个烟区采集的病叶样品检测结果均与ELISA检测结果一致,能够成功检测出CMV。

摘要：为了明晰影响贵州产区烤烟外观和感官质量的烟叶代谢物,按照唯一因素差别原则制备了2021年贵州产区不同外观特征的烤烟样品44个,对样品进行了外观评价、感官评吸、常规化学成分和代谢组测定,并通过相关性分析、主成分分析和聚类分析探索代谢物与烤烟外观和感官质量之间的关系。结果表明:(1)叶片结构、身份和油分3项外观质量指标与烤烟感官质量有较强的相关性。(2)赖氨酸、D-葡萄糖、肉豆蔻酸、松三糖、乳酸、海藻糖和蔗糖与烤烟感官质量具有较强的相关性,海藻糖和蔗糖对烤烟外观中的叶片结构和身份有较强的相关性。(3)相关性分析和代谢物差异分析结果显示,赖氨酸、D-葡萄糖、肉豆蔻酸、松三糖、乳酸、海藻糖和蔗糖等7种代谢物可能是影响烟叶感官和外观质量的关键代谢物。初步探明了影响贵州产区烤烟外观质量和感官质量的关键代谢物,对工业企业高效利用贵州产区烤烟具有一定的指导意义。

摘要：【目的】探索表征云南烟叶质量的关键指标,并明确各指标在不同质量档次烟叶中的差异。【方法】针对楚雄和丽江烟叶,采用唯一差别原则制备不同外观特征样品,进行外观和感官质量评价,以及常规化学成分和代谢组测定。采用随机森林分析筛选影响烟叶质量的关键质量指标,并以此对烟叶样品进行聚类分析。【结果】(1)筛选出12个关键质量指标:品牌符合度、香气质、杂气、叶片结构、身份、油分、淀粉、总糖、总氮、酚酸、高级脂肪酸和氨基酸;(2)将烟叶样品分为3个质量类别:类1烟叶杂气较轻,香气质中偏上,品牌符合度好,叶片结构疏松性较好,身份中等,总糖含量较高,总氮和酚酸、高级脂肪酸、氨基酸类代谢产物含量较低;类3烟叶杂气有,香气质中等,品牌符合度一般,叶片结构疏松性最差,身份稍厚,总糖含量较低,总氮和酚酸、高级脂肪酸、氨基酸类代谢产物含量较高;类2烟叶绝大多数指标介于类1和类3之间;(3)叶片结构、身份和总糖与烟叶质量呈正相关,总氮和酚酸、高级脂肪酸、氨基酸类代谢产物含量与烟叶质量呈负相关。【结论】本研究结果明确了楚雄和丽江烟叶生产、收购、加工和配方应用等环节需重点关注的指标,为提高烟叶质量和工业适用性奠定基础。