摘要：目的预测中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)LN-QY株VP3蛋白的空间结构及其B细胞抗原表位。方法采用RT-PCR法从感染CSBV的蜜蜂幼虫总RNA中扩增结构蛋白VP3基因,与pMD18-T载体连接后,转化感受态大肠杆菌DH5α,提取质粒,双酶切鉴定并测序,通过与SBV-KOR、CSBV-UK株VP3基因序列的比对,获得LN-QY株VP3基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列,建立VP3蛋白的3D结构。在此基础上,应用DNAStar软件中的Protean模块综合分析结构蛋白的柔性区域、亲水性、表面可能性以及抗原指数等参数。结果 VP3结构蛋白的空间构象较规则,其可能的B细胞抗原表位区域位于4个区域:25-50,101-109,112-120,250-268氨基酸区段,其中,可能出现抗原表位的2个区域在100-150和250-300氨基酸区段,应作为抗原表位研究的重点区域。结论预测了CSBV LN-QY株VP3蛋白的空间结构及其B细胞抗原表位,为CSBVVP3蛋白单克隆抗体的制备以及表位疫苗的设计奠定了理论基础。

摘要：用正交设计法研究了不同激素处理及不同外植体对安祖花愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明,在本试验设计中,外植体是诱导安祖花愈伤组织的主要因素;以茎段为外植体诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+1.0mg/L NAA+2.0mg/L 6-BA;愈伤组织不定芽诱导的主要因素是6-BA;不定芽诱导分化的最佳培养基为1/2MS+0.5mg/L 2,4-D+1.0mg/L 6-BA。

摘要：将HIV-1p24基因插入至人工设计的复合多表位基因MEG中,获得嵌合基因MEGp24;将MEGp24插入到转移载体pUTA2复合启动子ATI-P7.5×20下游,构建出鸡痘病毒重组转移质粒;经转染和BrdU加压筛选,以基因组PCR和Western blot法筛选出重组病毒;将重组病毒大量制备并纯化后,分别于0,14,42天肌肉注射免疫BALB/c小鼠;第3次免疫后一周,采集小鼠全血与脾脏,分离血清并无菌制备脾淋巴细胞,ELISA法检测小鼠血清HIV-1抗体、脾细胞培养上清中Th1类细胞因子IFN-α和IL-2的含量,流式细胞仪测定CD4+,CD8+T淋巴细胞亚类数量,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测脾特异性CTL杀伤活性.结果表明,重组病毒刺激小鼠产生HIV-1特异性抗体,出现T细胞亚类数量增加,产生针对HIV-1 H-2d限制性CTL表位的特异性靶细胞杀伤作用,同时免疫小鼠脾细胞在HIV-1抗原肽的刺激下分泌Th1类细胞因子的水平大幅增加.研究提示多表位嵌合基因重组FPV疫苗具有良好的免疫原性,可诱导小鼠产生HIV-1特异性细胞和体液免疫应答.

摘要：HAART对HIV/AIDS的治疗起到了重要的作用,但研制有效的疫苗是解决该全球性问题的最终方案.将人工设计的HIV-1多表位-p24DNA疫苗质粒pVAX1-MEGp24大量制备并纯化后,于0,4,8及18周肌肉注射免疫恒河猴,分别在第3次免疫和第4次免疫后2周(第10与第20周)采集血液,分离血清和外周血淋巴细胞(PBMC),乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测PBMC特异性CTL杀伤活性,ELISA法检测血清HIV-1抗体和PBMC培养上清Th1类细胞因子的含量,MTT法测定PBMC的增殖能力.结果表明,HIV-1多表位-p24DNA疫苗免疫组的恒河猴PBMC在恒河猴限制性HIV-1CTL表位肽刺激下产生针对HIV-1靶细胞的特异性杀伤活性,分泌Th1类细胞因子IFN-γ和IL-2的水平升高,并出现HIV-1特异性细胞增殖反应;该重组疫苗同时能诱导恒河猴产生HIV-1特异性抗体.结果提示,HIV-1多表位-p24DNA疫苗能诱导恒河猴产生HIV-1特异性细胞和体液免疫应答.