摘要：目的建立快速鉴定皮肤活检组织中分枝杆菌的荧光实时PCR方法并进行验证。方法自行设计针对分枝杆菌属和14种常见分枝杆菌的引物探针,建立分枝杆菌的荧光实时PCR检测体系和方法。利用12株分枝杆菌标准菌株对该方法进行体外验证,并对2019年至2021年北京大学第一医院皮肤性病科收集的119例临床诊断皮肤分枝杆菌感染患者的组织样本进行检测。结果体外检测显示该方法对12种分枝杆菌标准株均有良好的检测敏感性和特异性。在119例临床诊断分枝杆菌皮肤感染患者活检标本中,培养阳性率仅为21.0%(25/119);荧光实时PCR检测分枝杆菌阳性率为76.5%(91/119),其中,44.5%(53/119)鉴定至菌种水平,以海分枝杆菌为主;31.9%(38/119)仅鉴定至分枝杆菌属水平。结论建立了可在患者皮肤组织样本中高效检测分枝杆菌的荧光实时PCR方法,但仍有漏诊可能,还需结合其他分子诊断方法提高敏感性和特异性。

摘要：目的 评估本实验室设计的肺部常见病原真菌real-time PCR检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)标本对非中性粒细胞缺乏的老年人群肺部真菌病的诊断价值。方法 回顾性纳入2020年至2021年间于北京大学第一医院就诊的怀疑肺部感染的294名非中性粒细胞缺乏老年患者,采用real-time PCR检测其BALF标本中的病原真菌;根据宿主因素、临床表现和真菌学检查进行诊断分类,27名患者符合确诊或临床诊断的肺部侵袭真菌病,其中7例(25.6%)为多种真菌合并感染,6名患者诊断慢性肺曲霉病。结果 曲霉PCR Ct值受试者工作特征曲线下面积为0.936(95%置信区间0.865~1.000),最佳cut-off值为34.8,对肺曲霉病的诊断灵敏度和特异度分别为95.7%和92.1%。耶氏肺孢子菌PCR以Ct值37.1为cut-off值,诊断耶氏肺孢子菌肺炎灵敏度和特异度分别为94.7%和99.7%。隐球菌和毛霉PCR以Ct值35.0为cut-off值,在肺隐球菌病和肺毛霉病中阳性率分别为50%(2/4)和100%(1/1)。病原真菌real-time PCR确定cut-off值后,以PCR检出的真菌与肺部真菌病的致病真菌一致作为阳性,灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为86.5%(32/37)、91.0%(253/278)、56.1%(32/57)和98.1%(253/258),总符合率为90.5%(285/315)。结论本研究团队开发的病原真菌real-time PCR体系覆盖常见肺部致病真菌,初步探索了其在BALF标本中的cut-off值,证实该方法在非中性粒细胞缺乏老年患者的肺部真菌病中具有良好的诊断价值。