摘要：为建立一种可同时检测食品中弓形虫和旋毛虫的液相基因芯片方法,本研究以弓形虫B1基因和旋毛虫18S rDNA基因为靶序列,设计并合成特异性探针和引物,通过PCR方法扩增目的片段并测序,建立一种基于双重PCR的液相基因芯片检测方法。结果显示:在约180bp和90bp处分别扩增出目的条带;测序结果与GenBank登录的弓形虫和旋毛虫的相关基因一致性分别为99.47%和100%;液相基因芯片对单重PCR产物和双重PCR产物的检测结果一致,特异性和重复性良好。应用该方法检测弓形虫和旋毛虫变异系数(CV%)均在7%以内;灵敏度分别为65.6ng/mL和39.06ng/mL,比琼脂糖凝胶电泳灵敏高约8倍;模拟污染试验准确率达98%以上。本研究建立的液相基因芯片检测食品中弓形虫和旋毛虫的方法具有高效、灵敏和特异等优点,为食源性寄生虫的检测和监控提供了新方法。

摘要：目的对15个弓形虫虫株的弓形虫胚层发育相关蛋白（TgERP）基因进行克隆和序列分析，了解其变异和进化情况，为评价该蛋白在血清学诊断和疫苗防疫应用上的价值提供理论基础。方法设计TgERP基因的PCR引物，对15个弓形虫虫株进行PCR扩增和序列测定，测序结果利用Puzzle 5．2、Paup 4．0和DNAStar5．0软件进行分析。结果TgERP基因包含的完整开放阅读框（ORF）长度均为315bp，A＋T含量在46．67％～46．98％之间，仅有1个碱基发生变异，变异率为0％～0．32％。编码104个氨基酸，变异率在0％～0．96％之间。系统进化分析显示，TgERP基因序列虽然能够将弓形虫Ⅰ型虫株与Ⅱ／Ⅲ型虫株区分开，但却不能区分所有基因型的虫株。结论TgERP基因在各基因型虫株中十分保守，不适合作为遗传标记分子来区分不同基因型的弓形虫虫株。

摘要：根据BAC-TO-BAC杆状病毒表达系统的供体质粒,设计表达引物,从克隆质粒上扩增本地毛形线虫(Trichinella nativa)49kuES结构蛋白基因TNPG,酶切后与供体质粒连接,在大肠杆菌中克隆,将克隆有外源基因的供体质粒转化DH10Bac感受态菌,该菌含有杆状病毒穿梭载体,供体质粒中的外源基因在辅助质粒编码的转座酶作用下,通过转座而插入杆状病毒基因组中,筛选含有重组质粒的Bacmid DNA,用脂质体介导法转染昆虫细胞获得重组病毒。SDS-PAGE电泳显示表达蛋白为36ku的融合蛋白,Western blot检测表明表达的融合蛋白能够被小鼠旋毛虫的阳性血清识别。实验结果表明,本地毛形线虫的ES融合蛋白的制备将在诊断方法的建立和免疫研究方面具有很好的应用前景。

摘要：为快速诊断鸡艾美耳球虫感染,基于ITS1序列建立了鸡艾美耳球虫套式PCR鉴别检测方法。该方法实现了对鸡柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、早熟艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫和布氏艾美耳球虫间的快速鉴别。测序结果和序列比对分析显示ITS1序列具有良好的种特异性,可用于艾美耳球虫属下各虫种的鉴别诊断和分类学研究,基于ITS1序列建立的套式PCR方法为艾美耳球虫鉴别诊断和分子流行病学研究提供了新的工具。

摘要：对采自黑龙江省某动物园的东北虎源球虫虫种进行鉴定。对东北虎源球虫进行形态学观察;应用孢子化卵囊对犬进行感染性试验;根据已发表的猫等孢球虫核糖体内转录间隔区Ⅰ（ITSⅠ）序列设计引物,提取虫体基因组DNA扩增目的片段,并与其他球虫的ITSⅠ序列进行同源性比较。结果表明,根据形态学观察发现该球虫符合等孢属球虫的特征;用孢子化卵囊感染犬,结果不能在其粪便中检出卵囊;利用聚合酶链式反应（PCR）扩增的目的片段,与其他19种球虫的ITSⅠ序列同源性为35.97%~98.71%之间。通过对东北虎源球虫形态学观察、犬的感染性试验与分子鉴定,确定东北虎源球虫为等孢属球虫,并且与猫等孢球虫亲缘最近。

摘要：为了建立快速检测猪旋毛虫病的血清学方法,分别用旋毛虫GAD、GLS重组蛋白作为包被抗原,建立2种检测旋毛虫血清抗体的间接ELISA方法。对抗原包被条件、血清稀释度、封闭液的选择与封闭时间、酶标二抗的稀释度与孵育时间和TM B作用时间等条件进行了优化。旋毛虫GAD包被抗原间接ELISA方法和GLS包被抗原间接ELISA方法的阴阳性临界值分别为0.848和0.963;这2种间接ELISA方法批内和批间重复试验的最大变异系数均小于10%,且用这2种方法分别对猪蛔虫阳性血清、华支睾吸虫阳性血清和弓形虫阳性血清进行了检测,均无交叉反应,表明这2种方法具有很好的稳定性和特异性。同时用这2种间接ELISA方法和旋毛虫抗体快速检测卡分别对感染旋毛虫不同数量、不同时间的小鼠血清进行检测,结果显示,这2种间接ELISA方法具有较高的敏感性。本研究中建立的这2种间接ELISA方法为旋毛虫病的早期诊断和流行病学调查提供了必要的手段。

摘要：绵羊肺腺瘤病(OPA)于1850年发现,但国内外至今尚未建立绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)的体外培养方法及快速有效的实验室检测方法。为表达JSRV的衣壳蛋白(CA)基因,本研究根据JSRV CA基因编码序列设计特异性引物进行PCR扩增,克隆至pEASY载体中进行测序,并构建重组表达质粒pET-CA,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达。重组蛋白经SDS-PAGE检测约为28 ku,主要以可溶形式表达。将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔,制备抗血清。以制备的抗血清对重组蛋白及病毒进行western blot鉴定。结果显示,该抗血清能够识别重组蛋白及天然的JSRV。本研究首次原核表达了完整的CA重组蛋白,并制备了能够与天然JSRV结合的抗CA蛋白的抗血清,为进一步建立JSRV ELISA方法奠定了基础。

摘要：收集了中国８个地区不同宿主来源的旋毛虫虫株，提取虫体ＤＮＡ，应用Ｊｅａｎ设计的引物序列和不同的退火温度进行了ＰＣＲ扩增。结果：哈尔滨海伦猪株、长春犬株、沈阳猪株、河南南阳猪株、湖北十堰猪株、西安猪株、云南大理猪株均显示出家畜型旋毛虫特异的６０２ｂｐ目的ＤＮＡ基因片段；而哈尔滨五常犬株未见此片段。在４８℃和５０℃退火温度扩增显示，哈尔滨五常犬株和长春犬株均有３８０ｂｐＤＮＡ基因片段，而其他虫株未有此片段。

摘要：根据旋毛虫隔离种线粒体Ls-rRNA基因序列,设计一对特异性引物及TaqMan MGB探针。以Ls-rRNA阳性重组质粒为模板,建立了旋毛虫实时荧光PCR检测方法。该检测方法对各旋毛虫隔离种具有良好的特异性,而对小鼠、狗和猪正常肌肉组织、猪鞭虫、猪蛔虫、猪钩虫、犬蛔虫等无交叉反应。最小检出量为1.32×102拷贝(10-5条旋毛虫),建立的标准曲线拟合良好,扩增方程Y=-3.43X+19.70,相关系数R2=0.9984,扩增效率为95%。平行检测组内变异系数为1.11%(n=20),同一组不同浓度梯度样本(n=9)间隔30d重复检测,结果无显著性差异。人工感染不同剂量猪旋毛虫的小鼠,在攻虫14d后检出率100%。对经压片镜检、人工胃液消化、胶体金试纸条检测结果为阴性的63份送检狗肉样本中敏感地检出8个阳性。