摘要：噬菌体显示（ＰｈａｇｅＤｉｓｐｌａｙｉｎｇ）技术的原理在于将外源性基因与噬菌体本身的壳蛋白ＩＩＩ基因５’端相连，随后利用外源性插入片段与壳蛋白基因表达的融合蛋白位于噬菌体表面的优点，使目的噬菌体的筛选、富集更为简便、有效。在此基础上发展起来的噬菌体抗体、噬菌体抗体库以及随机多肽库技术则为抗体的制备、配体的发现、药物的设计与筛选提供了有效的手段。

摘要：B→O血型改造在平战时紧急条件下的输血方面具有重大意义。解放军军事医学科学院章扬培教授课题组利用基因工程,成功实现了B型血向O型血的转变,从而使国内的血型改造研究获得重大突破。为实现B→O血型改造过程的标准化、自动化,研制了一套B→O血型改造装置,实现了B→O血型改造工艺的自动化,将单次血型改造时间缩短到了手工操作的1/4,并且实现了工艺流程的标准化和密闭性,在使用一次性无菌管路耗材的情况下,从外部条件上满足了B→O血型改造结果用于临床的要求,为B→O血型改造在临床上的广泛推广奠定了基础。文章重点介绍了B→O血型改造装置控制系统的研制情况,包括软件及硬件系统的设计。该控制系统为 B→O血型改造过程提供了一种安全、高效的途径。

摘要：确定肝细胞生长因子 (HGF)、巨噬细胞刺激蛋白 (MSP)各 4个Kringle结构的共有序列并以此为基础设计公用引物 ,利用此公用引物可扩增出含不同数目Kringle的系列片段 ;以不同的组合方式连接 ,得到了系列缺失体和嵌合体 ;测序结果表明公用引物的简并性及所扩增序列与理论预期一致 .对以此法所构建的HGF/MSPK1缺失体表达后进行活性测定 ,提出MSP的K1是重要的功能决定区 .此外 ,提出了对内部存在引物酶切位点的cDNA片段的克隆策略 .

摘要：目的为构建野生型和酶活缺失型人乙酰肝素酶(HPA)的慢病毒表达载体,以探讨HPA的酶活性作用和非酶活性作用。方法根据GV358慢病毒质粒载体序列和HPA基因序列设计用于无缝克隆的引物,HPA的PCR扩增产物与线性化的GV358质粒载体连接,获得重组慢病毒质粒。将经测序验证的重组慢病毒质粒与包装质粒共转染HEK-293T细胞,收取病毒感染液并感染HEL细胞,利用Western印迹法鉴定HPA过表达效果;利用流式细胞术检测细胞表面硫酸乙酰肝素(HS)的表达量;利用ELISA检测多配体蛋白聚糖1(syndecan-1)的释放量,以验证野生型和酶活缺失型HPA慢病毒表达载体的生物学效应。结果重组慢病毒质粒测序结果符合预期;Western印迹法检测结果表明,过表达HPA的HEL细胞有明显的HPA蛋白表达;流式细胞术结果显示,过表达野生型HPA的HEL细胞表面HS表达量的几何平均荧光强度(160.0±8.0)明显低于空载体对照细胞(345.0±15.2)(P<0.01);ELISA结果显示,过表达野生型HPA的HEL细胞培养基中多配体蛋白聚糖1的释放量(59.0±3.8)ng·L-1较空载体对照细胞(32.2±3.9)ng·L-1明显增多(P<0.01);而过表达酶活缺失型HPA的HEL细胞系细胞表面HS的表达量(353.0±14.0)和培养上清中多配体蛋白聚糖1的释放量(30.9±2.9)ng·L-1则与空载体对照细胞相当。结论成功构建了野生型和酶活缺失型的HPA慢病毒表达载体,并利用HEL细胞系对野生型和酶活缺失型HPA的生物学效应进行了验证,为研究HPA在机体病理生理过程中的作用机制提供了新的工具。

摘要：为实现B→O血型改造过程的标准化、自动化,研制了一套B→O血型改造装置。重点介绍了B→O血型改造装置控制系统的研制,包括软件及硬件系统的设计。该控制系统为B→O血型改造过程提供了一种安全、高效的途径,为B→O血型改造在临床上的广泛应用奠定了基础。

摘要：确定肝细胞生长因子(HGF)和巨噬细胞刺激蛋白(MSP)各4个Kringle结构的共有序列并设计公用引物,此公用引物配合HGF和MSP上、下游引物,利用DNA聚合酶链式反应(PCR)技术,可在一次PCR反应中扩增出多条片段,以不同的组合方式将这些片段两两连接,得到了缺失不同Kringle的缺失体和两种分子间不同区域的缺失型嵌合体,从而为HGF和MSP结构与功能的研究奠定了基础。此方法可普遍适用于含有两个或两个以上Kringle分子的缺失体与嵌合体的构建。克隆过程中对存在引物酶切位点的cDNA片段的克隆方法的建立,为同类问题的解决提供了可靠的方法。

摘要：目的建立B→O血型转换红细胞(通用型红细胞)批量制备工艺,为临床提供通用型红细胞制品。方法用不同pH值的缓冲液对1个使用单位(200ml)的B型红细胞进行预处理。在专门设计的转型密闭处理系统中,用α半乳糖苷酶对B型红细胞表面B抗原进行酶解,并检测酶解后红细胞ABO血型抗原及结构、功能。结果酶解前用pH4.2缓冲液预处理组上清游离Hb含量显著低于pH2.8缓冲液处理组;经α半乳糖苷酶(100Uml红细胞)在pH5.6,26℃条件下酶解60min,红细胞B型抗原被完全清除,转换为O型;红细胞形态、变形性、ATP、2,3DPG、胆固醇含量、乙酰胆酐酯酶活性、渗透脆性、pH、上清游离Hb、K+、Na+含量与对照组(正常红细胞)比较差异无显著意义,均在正常范围。结论建立了B→O血型转换通用型红细胞的批量制备工艺。通用型红细胞结构、功能、形态均正常,细菌、热原实验合格。

摘要：目的:克隆肝素酶基因的可变剪接体并测序。方法:根据人肝素酶的cDNA序列设计引物,用RT-PCR方法从正常人外周血白细胞中扩增肝素酶基因的可变剪接体,构建至pGEM-T Easy载体中,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆并进行序列测定。结果:获得了肝素酶基因的3种可变剪接体形式,即5号外显子缺失可变剪接体、6号外显子缺失可变剪接体、5和6号外显子缺失可变剪接体,其中后2种可变剪接体尚未报道。结论:克隆了肝素酶基因的3种可变剪接体,有助于研究各种肝素酶可变剪接体编码蛋白的结构和功能及其在肿瘤发生转移过程中的作用。

摘要：目的主要解决患者俯卧位放疗时因体位造成的气道不畅问题。方法材料采用优质的木质材料及富有弹性的皮棉包装。结构设为前后两组:前组为三角型构造,下设滑槽板;后组为两边高中间凹的弧形形状。使用时下颌靠在支撑靠垫与两肩靠在后组支撑靠垫,胸部悬浮凹区域内,共同组成三位一体结构。设实验组与对照组,观察两组病人俯卧时呼吸过程的主观反应、客观反应及血流动力学的变化。结果实验组疗效明显优于对照组。结论多功能放疗枕设计新颖,结构简单、合理,使用舒适,解决了长时俯卧位对呼吸运动造成的诸多弊端,有利于疾病的恢复。