摘要：以黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)阳性样品为研究对象,根据其外壳蛋白基因设计3条引物和2条探针,探针5′端分别用生物素和荧光进行标记;利用这套引物和探针在59℃进行RT-PCR恒温扩增90min,扩增产物用核酸试纸条进行检测。用其它5种同样侵染葫芦科作物的植物病毒作为对照进行试验,以期确定试纸条检测方法的特异性。将梯度稀释后的总RNA作为模板进行检测,以确定该方法的灵敏度。结果表明:该试验建立的核酸试纸条检测方法对CGMMV具有特异性,能够有效区分CGMMV及同样侵染葫芦科作物的黄瓜花叶病毒(CMV)、辣椒轻斑驳病毒(PMMoV)、烟草花叶病毒(TMV)、番茄花叶病毒(ToMV)和小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV);同时该方法也具有较高的灵敏度,可检测低至24.300ng·μL^(-1)的总RNA。因此该试验建立的核酸试纸条法可用于CGMMV的快速检测。

摘要：黄瓜细菌性角斑病是我国黄瓜生产上的重要病害之一,其病原菌为Pseudomonas syringae ***。根据该病原菌甘油醛-3-磷酸脱氢基因保守序列设计引物和探针,建立了交叉引物恒温扩增和核酸试纸条检测技术。菌体DNA检测灵敏度可达0.55 ng,纯菌直接检测灵敏度基本可达到单个细菌。所测试的5株黄瓜细菌性角斑病菌和染病黄瓜叶片均为阳性,其他13株对照菌株均为阴性。该方法灵敏度高,且操作简单,对设备要求低等,适合基层实验室应用。

摘要：目的将一项新的分子生物学方法PCR-LDR-核酸检测试纸条法应用于katG基因315位密码子单碱基突变的检测。方法设计与合成用于检测katG基因315位密码子单碱基突变的引物和探针,通过LDR反应,使用核酸检测试纸条检测结果,并与PCR-RFLP法及直接测序法相比较。结果成功区分各突变类型及野生型,与PCR-RFLP法及直接测序法的检测结果呈高度一致性,符合率分别为97.5%和100%。结论将为katG基因315位密码子单碱基突变的检测提供一种快速廉价的分子诊断方法。