摘要：目的:建立有效检出中成药中细尖狼蝎成分的方法,检测获得中成药中全蝎掺伪情况。方法:收集《中华人民共和国药典》收载的30种含全蝎成分的中成药,提取DNA,比对线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列差异,分别设计全蝎源性和细尖狼蝎源性特异性鉴别引物并对退火温度、循环次数、Taq酶以及DNA浓度进行优化,最终确定细尖狼蝎最适PCR鉴别条件包括退火温度52℃,循环数为36,Taq酶为2×PCR Mix,DNA模板为1μL,通过建立的中成药中细尖狼蝎成分检出方法对市售30种中成药中全蝎投料情况进行鉴定。结果:经凝胶电泳检测,30个全蝎成分中成药均检出正品东亚钳蝎特有DNA条带,18种中成药(60%)在100~250 bp可见单一细尖狼蝎特异性DNA条带,空白对照无条带。对检出细尖狼蝎特异性条带的PCR产物进行TA克隆后测序,序列均与细尖狼蝎参考序列具有很高的相似性(92%~98%),系统发育结果表明获得的序列均与细尖狼蝎为同一支系而与东亚钳蝎不同,因此在120 bp左右出现单一条带可鉴定为细尖狼蝎。结论:中成药中全蝎投料存在以细尖狼蝎掺伪全蝎投料的现象,需要加强监管。本研究建立的方法可以快速准确检出中成药中细尖狼蝎成分,有利于完善全蝎中成药的质量控制方法,为其临床应用提供保障。

摘要：全蝎是我国临床常用动物药材,《中国药典》规定全蝎的唯一基原为钳蝎科动物东亚钳蝎,但目前我国蝎目物种丰富,全蝎药材及其深加工制品都存在混伪现象,其中全蝎深加工制品在加工过程中,其显微特征可能不完整或丢失,使得基原鉴别变得困难。该研究基于东亚钳蝎与其他蝎物种的形态和氧化酶亚基1(COⅠ)序列,构建ML系统发育树进行物种鉴定,从而发现全蝎主要混伪品为细尖狼蝎;使用特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴定方法,通过COⅠ序列的差异SNP位点设计东亚钳蝎特异性鉴别引物,并筛选出全蝎药材与其配方颗粒的稳定引物区间,对全蝎药材及配方颗粒进行鉴定。通过优化PCR反应体系,当退火温度61℃、循环次数30次时,东亚钳蝎及其配方颗粒均可扩增出约150 bp明亮的特异性条带,其他混伪品均无条带。并对该方法的适应性进行考察,全蝎药材到冻干粉再到配方颗粒以及市售配方颗粒均可扩增出约150 bp的条带。研究结果表明,该方法可用于全蝎药材及其配方颗粒真伪鉴别,有利于完善全蝎配方颗粒的质量控制体系,为其临床应用提供保障。