摘要：目的:探讨慢病毒介导的RNA干扰敲减泛素特异性肽酶39(ubiquitin specific peptidase 39,USP39)对人膀胱癌细胞生长和细胞凋亡的影响,为膀胱癌的治疗提供新思路。方法:RT-qPCR确定5637和T24细胞系中USP39 mRNA的表达;设计合成针对USP39的特异性shRNA,利用脂质体转染膀胱癌细胞后,RT-qPCR和Western blotting检测shRNA抑制效率;通过Celigo细胞计数测定、MTT法和集落形成能力检测细胞的增殖能力和集落形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting检测凋亡标记物C-PARP1、p53、p-p53和C-Caspase-3的表达。结果:通过RT-qPCR和Western blotting分析确定,shRNA敲减后细胞中USP39的mRNA和蛋白质表达水平显著降低。通过MTT分析、集落形成分析和流式细胞术分析证实,USP39的敲减显著降低了膀胱癌细胞的增殖和集落形成能力,并诱导了细胞凋亡。此外,Western blotting分析表明,USP39基因敲减可能通过上调膀胱癌5637细胞中p53、p-p53、C-PARP1和C-Caspase-3的表达诱导细胞凋亡。结论:敲减USP39可通过激活Caspase级联反应和上调p53的表达来抑制膀胱癌细胞的增殖。这些数据可为开发USP39作为抗膀胱癌的潜在分子靶标提供实验依据。USP39可能是针对膀胱癌靶向治疗的新型生物标志物,需要进一步研究。

摘要：目的:探讨基质金属蛋白酶MMP-10在人膀胱癌细胞体外侵袭中的作用。方法:设计并合成针对MMP-10的siRNA和阴性对照siRNA,以脂质体转染法将其分别导入具有体外高侵袭潜能的T24细胞系,RT-PCR和Western blot法检测MMP-10基因及蛋白表达水平。Transwell体外侵袭实验比较干扰MMP-10前后T24细胞体外侵袭潜能的变化。结果:MMP-10-siRNA可有效沉默MMP-10基因的表达,并降低T24细胞系的体外侵袭能力。结论:MMP-10可能在膀胱癌侵袭转移过程中发挥重要作用,抑制MMP-10可为预防及治疗转移性膀胱癌提供新的思路。

摘要：目的:探讨敲减MMP-10对人膀胱癌T24细胞系裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法:设计并合成针对人MMP-10的siRNA及阴性对照siRNA,分别注射至裸鼠皮下膀胱癌T24细胞系移植瘤,每周两次监测并比较各组裸鼠体重、瘤体大小,于接种后第5周处死裸鼠,取出皮下移植瘤,并比较各组瘤体重量的差异,并通过免疫组织化学染色检测MMP-10表达水平。结果:皮下注射膀胱癌T24细胞建立裸鼠皮下移植瘤模型,成瘤率达100%。瘤体内注射MMP-10 siRNA可以显著抑制膀胱癌T24细胞裸鼠皮下移植瘤的生长(P0.05),提示瘤体内注射MMP-10 siRNA对裸鼠的一般情况影响不大,并没有明显的毒性或副作用。免疫组织化学染色结果示MMP-10 siRNA组MMP-10的染色强度及阳性细胞数均明显低于普通成瘤组和阴性对照组,提示瘤体内注射siRNA可以在体内有效敲低MMP-10的表达。结论:MMP-10在人膀胱癌T24细胞裸鼠皮下移植瘤的生长过程中发挥重要作用;瘤体内注射MMP-10 siRNA可以有效且安全地抑制膀胱癌T24细胞裸鼠皮下移植瘤的生长。