摘要：目的研究特异性抗HPV16E6核酶对宫颈癌细胞表型和基因表达的影响.方法应用计算机软件设计抗HPV16E6核酶,并以体外切割实验验证其效率.以脂质体法将抗HPV16 E6核酶、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,命名为CaSKi-R、CaSKi-P细胞.点杂交检测核酶在细胞中的表达,Northern杂交检测细胞中E6基因的表达.测定三种细胞的生长曲线和软琼脂克隆形成率,检测其在裸鼠体内的成瘤能力.流式细胞仪检测三种细胞的凋亡率,并测定c-myc、bcl-2、p53、fas蛋白的表达.检测三种细胞表面抗原的表达,包括HLA-1、HL A-2、B7-1、B7-2.诱导NK、LAK、CD3AK细胞,测定它们对三种宫颈癌细胞的杀伤作用. 结果体外切割实验证实抗HPV16E6核酶能特异性切割靶基因,点杂交证明核酶能在CaSKi-R细胞中稳定表达,Northern杂交显示CaSKi-R中表达E6较CaSKi-P、CaSKi明显降低.与CaSKi细胞相比,CaSKi-R细胞生长速度、软琼脂克隆形成率明显降低,在裸鼠体内的成瘤性降低, 凋亡率明显增高.而CaSKi-P细胞无此改变.核酶的导入使CaSKi-R细胞表达HPV16E6、c- myc、bcl-2蛋白明显减少,而表达p53明显增高.CaSKi-R细胞中HLA-2、B7-1、B7-2抗原表达增高.NK、LAK、CD3AK细胞对CaSKi-R的杀伤作用明显高于对CaSKi细胞.结论抗HPV16E6核酶不但能部分逆转宫颈癌CaSKi细胞的恶性表型,而且能诱导CaSKi细胞凋亡, 提高其对免疫细胞的敏感性.

摘要：获得特异性抗人乳头瘤病毒（Ｈｕｍ ａｎ ｐａｐｉｌｌｏｍ ａｖｉｒｕｓ，ＨＰＶ）１６ 型和１８ 型Ｅ６ 基因的核酶（Ｒｉｂｏｚｙｍ ｅ），用以在基因调控水平防治ＨＰＶ相关性肿瘤。采用计算机软件针对ＨＰＶ １６Ｅ６ 基因和ＨＰＶ １８Ｅ６ 基因，设计相应的ｒｉｂｏｚｙｍ ｅ；体外合成核酶基因后，克隆于原核表达质粒中。将ＨＰＶ１６Ｅ６ 、ＨＰＶ１８ Ｅ６ 基因片段也克隆入原核表达质粒中，体外转录而得到核酶和病毒ｍ ＲＮＡ，进行体外切割实验以鉴定核酶的活性。抗ＨＰＶ１６Ｅ６核酶与抗ＨＢＶ１８Ｅ６ 核酶（抗１６ＨＲｚ和抗１８ＨＲｚ）被装入ｐＲＧ５２３载体中，体外转录后能将核酶独立地释放出来。体外切割实验证明抗１６ＨＲｚ和抗１８ＨＲｚ分别能准确、有效地识别和切割靶ＲＮＡ片段。所获得的抗１６ＨＲｚ和抗１８ＨＲｚ核酶能特异性切割靶ｍ ＲＮＡ。

摘要：测定了发生于我国东南海域赤潮原因种Phaeocystissp.及相关种类P globosa和P pouchetii18SrDNA序列,并以Phylip35分析软件构建序列距离矩阵和分子系统发育树图.结果表明,该赤潮原因种与球形棕囊藻P globosa18SrDNA序列完全相同,从分子水平鉴定了该原因种为P globosa.分子系统发育树图表示的P globosa和P pouchetii的分化顺序表明,分布于我国东南海域的P globosa可能是一种本地起源的暖水种.Phaeocystisglobosa不同株系的形态差异,可能是适应不同生活环境的结果.根据分子生物学的数据对有害赤潮藻类进行系统发育分析,并设计用于有害赤潮藻快速鉴定的特异性分子探针,对赤潮的监控和防治具有重要意义.

摘要：采用ＰＣＲ及序列测定的方法，对在厦门西港海域采集的赤潮铜绿微囊藻１６Ｓ和 ２３５ｒＤＮＡ基因间隔区Ｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃ Ｓｐａｃｅｒ Ｒｅｇｉｏｎ （ＩＳＲ）区进行了序列测定和分析，并通过与两 种淡水微囊藻的比较，找出了其特征性核苷酸作为专一性分子探针设计的靶序列，为该藻 种以及微囊藻属的快速鉴定及系统学研究提供了分子基础。

摘要：目的探讨细胞周期蛋白D1(Cyclin D1,CCND1)在U87胶质瘤细胞周期调控中的作用。方法根据NCBIGenBank中cyclin D1序列设计双链siRNA,利用Western blotting技术验证设计的siRNA序列的有效性,并通过流式细胞术检测抑制CCND1对U87胶质瘤细胞周期进程的影响。结果经Western blotting检测,成功抑制了CCND1的表达。并且抑制CCND1后,U87细胞周期停滞在G1期,抑制了U87细胞的G1/S期转换。结论 U87细胞中抑制CCND1可以显著抑制细胞周期进程,使细胞周期停滞在G0/G1期,为进一步研究胶质瘤的靶向治疗奠定了理论基础。

摘要：目的探讨细胞周期蛋白D3(CCND3)在LN308胶质瘤细胞中的作用。方法根据NCBI GenBank中cyclin D3序列设计双链siRNA,利用western blotting技术验证设计的siRNA序列的有效性,并通过流式细胞术检测抑制CCND3对LN308胶质瘤细胞周期进程的影响;通过transwell检测CCND3对LN308细胞迁移的影响。结果经western blotting检测,成功抑制了CCND3的表达。并且发现与对照组相比较,抑制CCND3表达对LN308细胞周期无影响,但是可以显著抑制LN308细胞的迁移。结论 LN308细胞中CCND3并不发挥调控细胞周期的功能,而是影响细胞的迁移,促进肿瘤的发展。本研究为临床上靶向治疗胶质瘤提供了理论基础。

摘要：目的　获得一种特异性抗人乳头瘤病毒(HPV)16型E6基因的核酶,用以在基因调控水平预防、治疗HPV相关性肿瘤。方法　以核酶(ribozyme,Rz)的锤头结构为模型,采用计算机软件针对HPV16E6基因,设计相应的Rz;体外合成其基因后,克隆于原核表达质粒中。将HPV16E6基因片段也克隆于原核表达质粒中,通过体外转录而得到核酶和病毒mRNA,进行体外切割试验以鉴定核酶的活性。结果　抗HPV16E6核酶(简称抗16HRz)被装入pRG523中而构成pRG16HRz,体外转录后能将核酶独立地释放出来。HPV16E6mRNA转录质粒pTZ16E6含有HPV16E6基因片段(+94位～+296位),体外切割实验证明抗16HRz具备切割活性,在体外能准确、有效地识别和切割HPV16E6mRNA片段,得到82nt和132nt的切割产物。结论　所获得的抗HPV16E6核酶能特异性切割HPV16E6mRNA,可作为对HPV相关性肿瘤进行基因治疗的工具。

摘要：以核酶（ribozyme）的锤头结构为模型，采用计算机软件针对HPV16R6、HPV18E6基因，设计了相应的ribozyme（简称抗16HR、抗18HR）。体外合成ribozyme基因后，克隆于带自身修剪功能的原核表达质粒pRG523中，构建成质粒pRG16HR、pGR18HR，为下一步研究抗16HR、抗18HR的体外活性和内效应，从而为探索以ribozyme治疗HPV相关性肿瘤的途经打下基础。