摘要：为构建中国幽门螺杆菌 (Hp)致病岛缺失突变的载体 ,采用PCR扩增、质粒抽提、琼脂糖凝胶电泳、限制性酶切、目的基因与载体的连接、感受态细胞的制备及转化等多种基因工程技术 ,将氯霉素抗性基因CmR 连接到PCR扩增致病岛两端区域产生的两目的基因片段之间 ,并共同插入到pBluescriptSK 载体的多克隆位点中 ,经氨苄青霉素抗性筛选及相应的限制性酶切等方法鉴定。构建的突变载体经内切酶酶切分析显示 :产生的条带与设计结果完全一致。

摘要：目的　构建cag致病岛缺失的中国幽门螺杆菌 (H .pylori)突变株。为cag致病岛功能及H .pylori感染致病多样性机制的研究奠定基础。方法　运用基因重组方法将氯霉素抗性基因(CmR)连接到PCR扩增cag致病岛两端区域产生的 2个目的基因片段之间 ,并共同插入到pBluescriptSK( )载体的多克隆位点中 ,构建出带氯霉素抗性标志的缺失突变载体pBS cag mutant,将突变载体转化到含完整cag致病岛基因的突变受体H .pylori菌株中 ,根据同源重组原理 ,筛选出cag致病岛缺失的中国H .pylori突变株 ,并经PCR方法鉴定。结果　构建的突变载体经内切酶酶切分析显示 :产生的条带与设计结果完全一致。PCR方法扩增cagA、cagⅠ、cagⅡ、尿素酶等基因的结果显示 :筛选出的细菌为缺失cag致病岛基因的H .pylori菌株。结论　我们成功地构建出 1株中国人来源的、cag致病岛缺失的H .pylori突变株 ,对于阐明cag致病岛功能及其在H .

摘要：本研究根据抗药基因(Multidrug resistance gene_1,MDR_1)的cDNA序列,设计了3对DNA引物,它们的起止位置分别为:Ⅰ-64～46(5’)和1680～1698(3’);Ⅱ1471～1489(5’)和2905～2923(3’);Ⅲ2729～2747(5’)和3845～3863(3’)。用PCR技术分别将这3对引物间的cDNA从人正常肝组织中的mRNA中克隆出,它们的长度分别为1762bp,1452bp和1134bp。前两者均分别克隆于pBluescript SK,后者克隆于pGEM7Z。所得3个克隆分别称为pMDR1.7,pMDR1.4和pMDR1.1。DNA序列分析证实这3个克隆均为MDR_1基因。进一步亚克隆得到MDR_1的全长基因,长度为3927bp(pMDR3.9)。MDR_1全长基因的克隆成功为肿瘤抗药性的分子诊断和基因治疗提供了最基本的手段。