摘要：背景:胰腺干细胞具有分裂与高度分化潜能的特性,可以在体外进行成功分离和培养,但体外如何对其进行有效扩增是亟待解决的问题。目的:在胎鼠成纤维细胞饲养层条件下体外传代培养小鼠胰腺干细胞。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-07/2008-01在广西中医学院基础医学院细胞无菌培养室完成。材料:SPF级新生昆明小鼠20只,孕14d昆明小鼠多只,均购自广西中医学院实验动物中心。方法:取SPF级新生昆明小鼠的胰腺组织,Ⅴ型胶原酶消化,未消化完全的组织块自然沉降后,收集上层的含细胞离散液,离心弃上清,加入含角质细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的无血清低糖DMEM培养基,在经多聚赖氨酸溶液处理的24孔板中培养。取孕14d昆明小鼠,剖腹取胎鼠,去除头部及内脏,将躯干及四肢采用组织块胰蛋白酶消化法分离培养成纤维细胞,调整密度为5×108L-1接种于24孔板中,传至第3代经丝裂霉素适当处理制备饲养层细胞。取原代培养5d的胰腺干细胞,按30个/cm2密度种入铺有饲养层细胞的孔板中,当胰腺干细胞铺满小孔底部面积的80%时继续传代。主要观察指标:倒置显微镜下观察细胞形态变化,原代培养48h对细胞进行碱性磷酸酶染色,通过免疫组织化学染色鉴定胰腺干细胞特异分子标志物巢蛋白的表达。分别于传代后2,3,4,5d检测碱性磷酸酶、巢蛋白和胰十二指肠同源盒基因1的表达。结果:原代培养的来源于胰腺组织的细胞中,可见一些大、圆、单个核的细胞,胞浆折光性强,核浆比例大,呈附壁生长,碱性磷酸酶染色呈阳性,表达胰腺干细胞特异性分子标志巢蛋白,且具有活跃的分裂增殖能力。在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层条件下对胰腺干细胞进行体外传代培养,可连续传至第3代,各代胰腺干细胞仍保持大、圆、单个核、核浆比例大及增殖能力强等特性,传代后各时间点碱性磷酸酶、巢蛋白染色均呈阳性,胰十二指肠同源盒基因1蛋白染色呈阴性反应,可保持未分化状态。结论:以小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层,经丝裂霉素C处理后可分泌供胰腺干细胞生长所需的因子,并抑制胰腺干细胞的自主分化,体外连续传至第3代仍能够保持较好的生长特性、高度增殖能力及未分化状态。

摘要：目的经正交设计的雷公藤多糖提取纯化实验,选出最佳雷公藤多糖提取纯化的工艺。方法雷公藤叶和根经粉碎后用无水乙醇润湿,封口过夜,挥干药材;用石油醚60～90℃回流提取1h,重复实验1次,挥干药材;用95%乙醇回流提取1h,重复实验2次,挥干药材;用去离子水水煮1h,重复实验2次,浓缩水提取液到与药材重量相等。浓缩水提取液经乙醇醇沉,抽滤得到沉淀物经过氧化氢脱色后,以不同水提取液与乙醇的比例、氯仿与正丁醇体积比、脱色液与Sevage试剂(氯仿:正丁醇)体积比、脱蛋白时间、除蛋白次数进行4因素3水平正交实验。结果雷公藤多糖提取纯化最佳工艺条件为水提取液与乙醇的比例为80%,氯仿与正丁醇为4∶1,脱色液与Sevage试剂为3∶1,次数为2次,雷公藤多糖的脱蛋白率为78. 5%,多糖损失率为33. 3%。结论经正交实验选出最佳雷公藤多糖提取纯化的工艺条件科学合理、稳定可行,为纯化雷公藤多糖提供实验依据。

摘要：雨课堂是一种融合互联网和大数据技术的全新教学工具,基于疫情防控和教育现代化的大背景,医学细胞生物学课程采用雨课堂教学有利于提升教学成效。文章以广西中医药大学基础医学院2019级临床医学专业学生春季学期开展的医学细胞生物学雨课堂教学实践为例,设计基于雨课堂的课前-课中-课后混合式教学活动,充分调动学生主动学习细胞生物学的积极性和热情,并以期末成绩作为教学效果评估指标。最后初步探讨运用雨课堂的优势和局限性,期望能为临床医学专业细胞生物学课程教学提供有价值的参考和建议。

摘要：[目的]克隆红色毛癣菌(Trichophyton rubrum)无机磷酸盐转运蛋白(Inorganic phosphate transporter,PHO88)基因,构建原核表达质粒,并对PHO88蛋白进行生物信息学分析。[方法]根据Gen Bank公布的T. rubrum CBS 118892菌株pho88基因序列(XP-003235348),设计合成特异性引物,提取红色毛癣菌总RNA,反转录为c DNA,PCR扩增pho88基因,构建到原核表达载体p ET-28a上,测序鉴定其序列,并对其进行生物信息学分析。[结果]红色毛癣菌pho88基因全长582 bp,编码193个氨基酸。PHO88蛋白含有1个跨膜结构域,细胞亚定位为分泌信号途径蛋白,PHO88含有16个磷酸化修饰位点,其二级结构主要由α-螺旋构成,高级结构为全α型蛋白质。[结论]成功克隆红色毛癣菌pho88基因及构建原核表达质粒,为后续PHO88蛋白的诱导表达奠定基础,为后续开发靶向PHO88的抗真菌药物,提供实验基础。

摘要：背景： 关于消化外套膜组织获得的细胞悬液是否能在体外有效地扩增形成珍珠囊以及最终形成珍珠仍存在争议，且这方面研究不多。目的：建立一套有效的马氏珠母贝外套膜组织细胞体外分离及培养的技术和方法，同时探讨体外形成具有完整结构和分泌功能的珍珠囊并最终生成优质珍珠的最佳方法。设计、时间及地点：单一样本观察，于2008-08/12在广西中医学院基础医学院完成。材料：贝龄1.0~2.0岁马氏珠母贝由广西北海市营盘珍珠实业有限公司提供，自配改进的海水贝类平衡盐溶液（MWBSS）；自制珍珠贝血清和珍珠贝体液；角质细胞生长因子为美国Sigma公司产品。方法：使用2.5 g/L胰蛋白酶消化马氏珠母贝外套膜组织，收获的细胞使用M199（含体积分数10%胎牛血清）培养基进行培养，并在其中加入10 μg/L的角质细胞生长因子、10%自制的珍珠贝体液和贝血清，持续培养30 d。主要观察指标：细胞生长特性和生长状态。结果：体外培养的珍珠外套膜上皮细胞增殖迅速，分泌功能旺盛，肌肉细胞增殖能力强，并最终能包裹外套膜上皮细胞，形成结构较完整、分泌能力较强的珍珠囊。结论：使用改进的培养技术和培养体系中添加角质细胞生长因子在体外培养珍珠外套膜组织细胞，可获得生长状态和分泌功能均较好的珍珠囊。