摘要：Hsp27是小分子量热休克蛋白亚家族的重要成员之一,主要参与细胞内蛋白质的折叠、抗凋亡、甾体激素合成、氧化应激及信号通路等生理过程。为进一步研究其生理与病理生理功能,本文构建了针对小鼠Hsp27基因的小分子干扰RNA(siRNA)重组腺病毒载体,并在AD-293细胞中与Hsp27超表达载体共同转染,观察其对Hsp27表达的影响。根据siRNA靶序列的设计要求,设计并合成针对小鼠Hsp27的siRNA靶DNA序列,克隆至穿梭载体pShuttle-H1中,与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在B J5183细菌中进行同源重组,转染AD-293细胞,包装得到含siHsp27的重组腺病毒,在体外与Hsp27超表达载体共转AD-293细胞。通过酶切鉴定、序列测定和W estern b lot鉴定,确定小鼠Hsp27 siRNA重组腺病毒载体构建成功,且该重组腺病毒能降低67%的Hsp27蛋白表达。本文构建的针对小鼠Hsp27基因的siRNA重组腺病毒载体,为进一步研究Hsp27基因的功能奠定了基础。

摘要：目的探讨核心家庭中脊髓灰质炎病毒受体相关2(PVRL2)基因SNP位点突变与非综合征性唇腭裂(NSCL/P)的关系。方法用基因芯片技术检测50例华东地区核心家庭的PVRL2基因SNP位点(rs2075642)的突变情况。设计病例对照和核心家庭对照,用医学统计学方法,比较突变位点在患儿与正常儿童中的分布情况,比较患儿组与父母组的基因型和等位基因频率,并对核心家庭的数据进行单倍型相对风险分析(HTRR),对含杂合子父母的核心家庭进行传递不平衡检验(TDT)。结果PVRL2的rs2075642位点突变在患儿与正常儿童中的分布差异有统计学意义,患儿与其父母各位点基因型和等位基因分布差异无统计学意义(P>0.05),HTRR结果有统计学意义,TDT结果无统计学意义。结论PVRL2的rs2075642位点突变可能与中国华东人群非综合征性唇腭裂存在相关性。

摘要：目的以每取卵周期的累积活产率（CLBR）作为评价体外受精或卵母细胞胞质内单精子注射技术（IVF／ICSI）妊娠结局的指标，探讨不同卵巢刺激方案IVF／ICSI妊娠结局的影响因素。方法回顾性分析2014年1月1日至2015年12月31日在南京医科大学第一附属医院接受IVF/ICSI治疗的不孕症患者，共6142个取卵周期，分析不同卵巢刺激方案（长方案、拮抗剂方案、温和方案）的临床及实验室指标，比较患者年龄、不同获卵数、可移植胚胎数对每取卵周期CLBR的影响。结果（1）长方案和拮抗剂方案患者的每取卯周期CLBR分别为69．0％（2004／2906）和67．4％（644／955），两者比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；温和方案患者每取卯周期的CLBR为53．2％（1215／2281），显著低于前两者（P均〈0．05）。（2）对不同年龄段的患者进行比较发现，对于20～25岁的患者，3种方案的每取卵周期CLBR均无差异（P均〉0．05）；而对于26～35岁的患者，长方案和拮抗剂方案的每取卵周期CLBR均显著高于温和方案（P均〈0．05）。（3）随着获卵数的增加，3种不同卵巢刺激方案患者的每取卵周期CLBR均呈上升趋势，当获卵数≥6个，每取卵周期的CLBR上升趋于平缓。按不同获卵数比较发现，在获卵数为0～4个时，拮抗剂方案每取卵周期的CLBR（50．O％）高于温和方案（37．0％）；获卵数为5-9个时，长方案和拈抗剂方案的每取卵周期CLBR（分别为66．3％、65．6％）均高于温和方案（54．5％），分别比较，差异均有统计学意义（P均〈0．05）；而当获卯数≥10个时，3种不同方案的每取卵周期CLBR均无差异（P均〉0．05）。（4）随着可移植胚胎数的增加，3种不同卵巢刺激方案患者每取卵周期的CLBR均呈上升趋势。（5）中～重度卵巢过度刺激综合征的发生率在长方案患者中（5．2％，152／2906）显著高于拮抗剂方案者（4．4％，42／955），拈抗剂方案显著高于温和方案者（1．5％，34／2281），分别比较，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。结论每取卵周期的CLBR是评估IVF／ICSI妊娠结局的重要指标，与常规单个移植周期的活产率相比更能反映辅助生殖技术的助孕效能。年龄、获卯数和可移植胚胎数是影响每取卵周期CLBR的重要因素。针对不同年龄和卵巢反应的患者，应设计个体化的促排卵方案，可获得较高的每取卯周期CLBR，减少药物费用和促排卵并发症的发生风险。

摘要：目的:探讨SKI基因257C>G多态与中国华东地区部分人群非综合征性唇腭裂(NSCL/P)发生的关系。方法:采用病例对照设计,应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP),进行SKI基因257C>G多态性检测,并进行遗传统计分析。结果:对于SKI基因257C>G,8个杂合子父母及患儿的核心家庭TDT检验(χ2=3.56,P>0.05);50例NSCL/P患儿和50例正常儿童基因型及等位基因频数病例对照研究(χ2=2.08,P>0.05)。结论:SKI基因257C>G位点多态与中国华东地区部分人群NSCL/P的发生无相关性,可能不是NSCL/P的主要易感基因。

摘要：目的SET基因表达产物是SET／TAF-1β蛋白，功能涉及基因表达调控、染色质修饰、翻译后修饰等生物过程，多水平、多通路地调节靶因子，其表达异常与多种疾病相关。为研究SET基因与临床多种疾病发生发展的关系，文中构建表达人SET基因的小分子干扰RNA（siRNA）重组腺病毒载体。方法根据siRNA靶序列设计并合成2条互补的64 bp寡核苷酸。pShuttle-H1穿梭质粒经BglⅡ、HindⅢ双酶切后，与退火的寡核苷酸连接，构建穿梭质粒pShuttle-H1-siRNA。该穿梭质粒经Not Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后与pAdTrack-CMV连接，构建含有绿色荧光蛋白（green fluorescense protein，GFP）报告基因的穿梭质粒PATC—H1-siRNA。分别将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1和穿梭质粒PATC—H1-siRNA转化至BJ-5183感受态细菌中进行同源重组。Pac Ⅰ酶切线性化重组质粒pAd—H1-siRNA后，转染AD293细胞进行病毒包装和扩增。根据GFP报告基因的表达观察重组病毒的产生和感染效率，用Western blot检测人SET蛋白的表达水平。结果穿梭质粒pShuttle-H1-siRNA经双酶切和测序证实构建成功；重组腺病毒载体经AD293细胞包装后可观察到GFP表达；获得的重组腺病毒载体感染AD293细胞。经Western blot检测，SET基因腺病毒载体（AdH1-SiRNA／SET）感染组与未感染腺病毒载体组（空白对照）和感染对照腺病毒载体组（AdH1-SiRNA／NS）相比，SET蛋白表达水平显著降低（P〈0．05），抑制效率为50％～70％。结论成功构建了表达人SET基因的siRNA重组腺病毒载体AdH1-siRNA／SET，并在AD293细胞中验证其抑制SET蛋白表达的作用，为进一步研究SET基因参与多种疾病的发生发展提供了材料。