摘要：目的:联合应用RNAdraw和Sfold软件设计并筛选低毒且高效抑制Hela细胞Ku70 mRNA表达的反义寡核苷酸。方法:从GenBank获得人Ku70 mRNA全序列,联合应用RNAdraw与Sfold软件,根据最小自由能原理设计多条20 nt的反义寡核苷酸,脂质体转染后MTT法检测其非序列特异性细胞毒性,选择毒性最小者并转染Hela细胞,RT-PCR检测转染前后Ku70 mRNA的表达水平并进行比较。结果:靶向Ku70 mRNA设计6条20 nt的反义寡核苷酸,其中NO.1序列非特异性毒性最低,对Hela细胞的生长抑制率(50、100和200 nmol.L-1浓度组分别为4.8%、9.5%和10.2%)与脂质体组比较差异无显著性(P>0.05),用毒性最低序列转染Hela细胞后使Ku70 mRNA表达水平显著降低(P<0.01),条带强度和面积与未转染组比较分别下降81.6%和77.6%。结论:联合应用计算机软件RNAdraw和Sfold对设计反义核酸有较大的指导意义,能实现较高的命中率,设计的反义寡核苷酸能有效抑制Hela细胞Ku70mRNA的表达。

摘要：目的:构建人NOB1基因的短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体并在卵巢癌SKOV3和HEY细胞上鉴定其沉默效率。方法:针对NOB1基因设计特异性siRNA靶点,构建于慢病毒pLVTHM载体,筛选获得的有效shRNA慢病毒载体在293T细胞包装成病毒颗粒,随后将其感染卵巢癌SKOV3和HEY细胞,采用Real-timePCR方法检测靶基因在mRNA水平的沉默效率。结果:构建的慢病毒载体shRNA的PCR鉴定和测序正确,包装病毒后滴度达到8×108PU.L-1。shRNA慢病毒颗粒感染SKOV3和HEY细胞后NOB1基因的mRNA表达量较阴性对照载体慢病毒感染组分别下降了73.5%和82.2%。结论:成功构建NOB1基因的shRNA慢病毒表达载体,该慢病毒表达载体能够在细胞水平有效沉默靶基因。

摘要：产前诊断已从侵入性技术逐渐向非侵入性技术过渡.经孕妇生殖道采集胎儿细胞,正以其取材简便、容易获取胎儿细胞及费用低这一优势吸引着众多的研究者.如何提高胎儿细胞获取率,如何克服来自精液污染等干扰因素,又是该领域中出现的新问题.本研究通过使用自行设计的套管拭子,选择子宫下段作为取样部位,与普通拭子法进行比较性研究,探讨解决上述问题的新途径.

摘要：目的构建人Rac1基因shRNA表达质粒,为提高卵巢癌放化疗的敏感性奠定基础。方法根据GenBank中登录的人Rac1基因序列,应用shRNA设计软件设计并合成用于构建shRNA表达质粒的oligo DNA,构建shRNA重组质粒。将阳性Rac1基因shRNA重组质粒经脂质体介导转染卵巢癌Skov3细胞,48 h后经RT-PCR筛选有效的shRNA重组质粒。结果经限制性内切酶BamHⅠ和PstⅠ酶切鉴定出阳性Rac1基因shRNA重组质粒,序列比对分析结果与理论序列完全一致。RT-PCR检测显示,转染pGPU6/GFP/Rac1-524的Skov3细胞Rac1基因mRNA的转录水平下降。结论已成功构建人Rac1基因shRNA表达质粒,并筛选出有效的干扰质粒pGPU6/GFP/Rac1-524。

摘要：目的研究辐射对转染DNA依赖的蛋白激酶shRNA-(DNA-PK)的卵巢癌Skov3细胞G2的影响。方法培养4个6孔板的Skov3细胞及设计shRNA和shNC载体(对照载体)后进行转染,转染成功后将其分为四个组:shNC组、DNA-PK shRNA组、shNC+照射组、DNA-PK shRNA+照射组,并对照射组分别进行辐射4 h及28 h后采集细胞,采用流式细胞术检测四组Skov3细胞进入G2期的情况。结果 (1)辐射4 h后,四组进入G2期的Skov3细胞所占比例差异具有统计学差异(F=8.65,P<0.01),DNA-PK shRNA+照射组进入G2期的Skov3细胞比例为(18.56±2.79)%,与shNC+辐射组(18.56±1.57)%比较无差异(t=0.00,P=1.00),但明显高于DNAPK shRNA转染组(14.38±1.70)%(t=3.13,P=0.01);(2)辐射28 h后DNA-PK shRNA+照射组进入G2期的Skov3细胞比例是(11.26±3.31)%,与转染shNC+辐射组(11.71±1.28)%比较无差异(t=0.31,P=0.76),但明显高于DNA-PK shRNA转染组(4.42±1.59)%(t=4.56,P<0.01)。结论通过干扰DNA-PK的表达,可使辐射后卵巢癌G2期细胞明显增多,从而提高卵巢癌细胞对于辐射的敏感性。

摘要：目的探讨RNA干涉技术(RNAi)沉默葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因对人卵巢癌SKOV3细胞侵袭力的影响,阐明GRP78基因沉默对SKOV3细胞侵袭力抑制作用的生物学机制。方法设计并构建pSilencerTM3.0-H1-GRP78 siRNA重组质粒,脂质体介导转染至SKOV3细胞。RT-PCR和Western印迹法检测GRP78基因表达;RT-PCR检测MMP-2、MMP-9 mRNA表达;Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭力;Transwell小室迁移实验检测细胞迁移率。结果 RT-PCR及W estern印迹检测转染GRP78 siRNA重组质粒SKOV3细胞GRP78基因表达抑制;RT-PCR结果显示与对照组相比转染GRP78 siRNA重组质粒SKOV3细胞MMP-2、MMP-9 mRNA表达降低;Transwell小室侵袭实验和迁移实验结果显示转染GRP78 siRNA重组质粒SKOV3细胞穿透细胞数(P<0.05)和迁移率均明显降低(P<0.05)。结论①转染GRP78 siRNA重组质粒有效抑制SKOV3细胞GRP78基因表达;②抑制GRP78基因表达能降低SKOV3细胞的侵袭力和迁移力,有望为抑制卵巢癌转移基因治疗提供新的靶点。

摘要：目的构建重组HDAC1基因的短发夹RNA(shRNA)慢病毒干扰质粒并研究其对卵巢癌COC1细胞HDAC1表达的影响。方法针对HDAC1基因设计特异性siRNA靶点,构建慢病毒干扰质粒载体,筛选获得的有效shRNA慢病毒干扰序列,将其转染卵巢癌COC1细胞。采用Real-time PCR方法检测靶基因在mRNA水平的沉默效果,Western blot方法检测靶基因在蛋白质水平的沉默效果。结果构建的慢病毒载体shRNA的PCR鉴定和测序正确。shRNA慢病毒干扰质粒转染COC1细胞后HDAC1基因的mRNA表达量和蛋白质水平较阴性对照质粒转染组均显著下调(P<0.05)。结论成功构建HDAC1基因的shRNA慢病毒干扰质粒,该慢病毒干扰质粒能够在细胞水平有效沉默靶基因。

摘要：目的探讨虚拟仿真融合型教学方式在妇科腔镜技术选修课程中的应用效果。方法选取2021年9—11月期间2批次选修妇科腔镜技术课程的中国医科大学2018级五年制临床医学专业89名学生为研究对象,按照不同选课时间将其分为试验组和对照组。试验组46名学生采用虚拟仿真融合型教学方式,对照组43名学生采用传统教学方式。课程结束后,通过理论考试成绩、实践考核总分和教学满意度调查结果,比较两种教学方式的实施效果。结果试验组学生的理论考试成绩[(39.98±4.20)分]和实践考核总分[(42.87±1.05)分]均高于对照组学生[(37.74±5.87)分,(41.12±1.72)分],其差异均具有统计学意义(均P<0.05)。教学满意度调查结果显示,试验组学生在课程设计、教学方法、教学资源、教学效果和学习体验等方面的评分均高于对照组学生,其差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论虚拟仿真融合型教学方式应用于妇科腔镜技术选修课程,有助于提高学生的学习兴趣、学习主动性和学习效能;同时,仍然有待于不断完善,以更好地服务于医学人才培养和医学教育事业。