摘要：心杆套零件如图1,通过多种技术方案的分析论证,最后以冷挤压为最佳方案,因为它具有生产速度快、操作简单、材料利用率高和确保产品质量等优点。 本文着重从5个方面综合总结心杆套在研制过程中的工艺分析、产品材料选择、质量控制、模具设计以及通过批量生产后工艺和模具的改进。图2即心杆套冷挤工艺图,产品最小内径φ4.4和外圆弧R7.8采用机加工配合完成。

摘要：目的:构建并筛选特异性干扰Notch信号通路核转录因子Rbpj基因的重组腺病毒,探讨通过Rbpj的经典Notch信号通路在骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)9诱导骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化中的作用。方法:设计3对针对小鼠Rbpj的siRNA序列,将其分别亚克隆至pSES-HUS穿梭质粒,再与骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183内同源重组获得重组质粒,经脂质体转染至HEK293细胞中包装扩增腺病毒,利用RT-PCR及Western blot进行筛选、验证有效的干扰腺病毒。该重组腺病毒与AdBMP9处理MSCs细胞株C3H10T1/2,采用组织化学和RT-PCR检测早期成骨指标碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和晚期成骨指标骨桥蛋白(osteopontin,OPN),骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)及BMP下游靶基因Id 1、Runx 2等的表达。结果:成功构建了3个重组腺病毒,并筛选出干扰效率最好的AdsiRbpj-2重组腺病毒,转染C3H10T1/2,AdsiRbpj-2可以明显下调BMP9诱导的早期成骨指标ALP的活性及晚期成骨指标OPN、OCN的表达,成骨相关基因Runx 2等的表达也有下降。结论:成功构建了特异性阻断Notch经典信号通路腺病毒载体AdsiRbpj-2,该重组腺病毒能够抑制BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的成骨分化进程,从而进一步证明Notch信号通路在BMP9诱导的MSCs成骨分化过程中有着重要的作用。

摘要：背景:国内外研究发现人参皂苷及其单体在抑制白血病细胞增殖、增加化疗药物的敏感性和逆转耐药等方面均有疗效,目前主要集中于对实体瘤和急性白血病的研究,涉及慢性白血病的报道非常少。目的:探讨人参皂苷单体Rb1,Rg1对人慢性粒细胞白血病细胞K562增殖的影响。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-03/2009-03在重庆医科大学干细胞与组织工程研究室和眼科实验室完成。材料:K562细胞由重庆医科大学临床检验系提供。纯度为98.6%的人参皂苷单体Rb1,Rg1由南京艾斯替么中药研究所提供。方法:取对数生长期的K562细胞,调整密度为7×108L-1,空白对照组予以常规培养;人参皂苷单体Rb1组分别加入20,40,80,160μmol/L的Rb1;人参皂苷单体Rg1组分别加入5,10,20,40,80μmol/L的Rg1。主要观察指标:MTT比色法、锥虫蓝拒染法检测K562细胞增殖情况,流式细胞仪测定细胞周期分布的变化。结果:人参皂苷单体Rb1,Rg1在体外对K562细胞增殖均有明显的抑制作用,在20～160μmol/LRb1和5～20μmol/LRg1浓度范围内,其抑制作用呈浓度依赖性,且均在作用48h时抑制率达高峰。与空白对照组比较,体外培养48h后160μmol/LRb1组细胞周期分布无变化;20μmol/LRg1组S期细胞比例明显增加(P<0.05),G1期细胞比例明显下降(P<0.05),且160μmol/LRb1组、20μmol/LRg1组均未出现"亚二倍体"峰。结论:人参皂苷单体Rb1,Rg1均可抑制K562细胞增殖,Rg1增殖抑制作用可能是通过将K562细胞阻滞于S期而实现的,而Rb1的增殖抑制作用与细胞周期的关系有待进一步分析。