摘要：目的克隆人细胞空泡蛋白分选因子4A(human vacuolar protein sorting 4A,hVPS4A)基因,构建其真核表达质粒。方法以Huh7细胞cDNA为模板,设计引物扩增全长hVPS4A基因,再将目的基因插入到真核载体pRK5中。重组质粒经PCR、酶切和DNA测序确认。结果从Huh7细胞cDNA中扩增得到约1 350bp大小的目的片段,经回收、纯化、酶切后与载体pRK5连接,转化DH5α大肠杆菌。选择PCR鉴定阳性的重组质粒,经EcoRⅠ单酶切可见约一条5 900bp片段;经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切可得到4 600bp和1 350bp两个片段,分别与载体pRK5和目的片段hVPS4A预期大小一致;DNA测序结果显示插入片段与hVPS4A参考序列一致。结论成功构建了含hVPS4A基因的真核表达载体,为进一步研究hVPS4A的生物学功能提供了条件。